免疫检验自动化仪器分析核心原理与方法评价.pdfVIP

第二十章免疫检验自动化仪器分析

第一节自动化免疫浊度分析系统

免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免

疫复合物（＜19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（＞19S），使反应

液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊

度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。

一、免疫透射比浊法

（一）原理

可溶性抗原抗体反应后形成的免疫复合物，使介质浊度发生改变，光线通过抗原抗体反应后的溶液时，

被其中的免疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下，吸光度（A值）与免疫复合物量呈正相关。与已

知浓度的抗原品相比较，可确定标本中抗原的含量。

仪器工作过程

1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。

2.将待测标本和抗原溶液（5个浓度抗原品）与适当过量的抗混合，在一定条件下，抗原

抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。

3.按方程进行曲线拟合，剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。

（二）方法评价

1.优点：灵敏度比单扩法高，操作简便，结果准确，且能用全自动或半全自动生化分析仪进行检测。

2.不足：①抗体用量较大；②溶液中IC分子若过小则阻挡不了光线的通过；若数量太少则对光通量影

响不大；灵敏度较散射比浊法低；③透射比浊测定在抗原-抗体反应的第二阶段，检测需在抗原-抗体反应

达到平衡后进行，耗时较长。

二、免疫胶乳比浊法

（一）原理

用抗体致敏胶乳颗粒，在遇到相应抗原时，形成IC，引起胶乳颗粒凝聚。抗原-抗体反应后溶液的吸光

度或散射光强度与待测抗原浓度呈正相关。采用透射比浊法或散射比浊法测定。

（二）方法评价

本法敏感度高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；

中的类风湿因子（RF）可与IgGFc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F（ab′）

2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重

影响结果。

三、免疫散射比浊法

（一）原理

溶液中的微粒受到光线照射后，微粒对光线产生反射和折射而形成散射光。

散射光强度与颗粒的分子量、数目、大小及入射光强度成正比，与微粒至检测器的距离、入射光波长

成反比，因此使用高强度光源如激光、较短波长的入射光，可提高检测灵敏度。

当颗粒直径小于入射光波长的1/10时，散射光强度在各个方向的分布均匀一致，称为Rayleigh散射；

当颗粒直径大于入射光波长的1/10到接近入射光波长时，随着颗粒直径增大，向前散射光强于向后散

射光，称为Debye散射；

当颗粒直径等于或大于入射光波长时，向前散射光远远大于向后散射光，称为Mile散射。

在免疫浊度测定中，可溶性抗原与相应抗体反应，生成的免疫复合物颗粒由小变大，而且免疫复合物

Chapter20Immunoassayautomatedinstrument

analysis

Section1Automatedimmunoturbiditya

nalysissystem

Immuneturbidityanalysisisaliquidphaseprecipitationtest.Itsbasicprincipleisthatandantibodiesreactinaspecific

electrolytesolutiontoformsmallmoleculeimmunecompl