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病理科细胞学涂片制作操作规范
演讲人：
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细胞学制片概述
痰涂片制作规范
粘膜及分泌物涂片制作
液体标本涂片技术
涂片染色与质量控制
特殊场景应用与案例
01
细胞学制片概述
PART
制片目的与基本原则
保证诊断准确性
通过标准化制片流程确保细胞形态完整、分布均匀，为病理医师提供清晰的诊断依据，减少假阴性或假阳性结果。
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防止交叉污染
严格执行无菌操作规范，对不同标本类型（如体液、细针穿刺物）使用独立耗材，避免样本间相互干扰。
优化染色效果
根据标本性质（如宫颈脱落细胞、浆膜腔积液）选择适宜的固定液（如95%乙醇、液基细胞保存液）和染色方法（巴氏染色、Diff-Quik染色），确保细胞核与胞质对比清晰。
质量控制要求
每批次制片需包含质控样本，监控固定时间、离心速度等关键参数，确保制片重复性与稳定性。
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标本接收与核对流程
双人核对制度
接收标本时需由两名工作人员同步核对申请单信息（患者姓名、病历号、标本类型）与容器标签一致性，记录接收时间及标本状态（如量、颜色、凝固情况）。
不合格标本处理
对渗漏、量不足或未标注信息的标本立即联系临床科室补送，并在LIS系统中标注拒收原因，留存书面记录备查。
分类编号规则
按照标本来源（如痰液、尿液、胸腹水）及检测项目（如HPV分型、细胞块制备）分配唯一编号，确保全程可追溯。
预处理登记
登记标本离心条件（如胸腹水需3000rpm×10分钟）、是否需要消化（如黏液性痰液加用胰蛋白酶），并标注特殊处理要求。
常用制片方法分类
适用于黏稠标本（如痰液），用竹签或玻片楔形端均匀涂抹，强调“厚薄适宜”原则，避免细胞堆积或撕裂，固定后需进行HE或巴氏染色。
通过自动化仪器（如ThinPrep、SurePath）将标本分散于保存液中，过滤杂质后吸附细胞于玻片，显著提高宫颈癌筛查的敏感性与特异性。
针对低细胞量标本（如脑脊液），利用离心力将细胞沉积于玻片特定区域，需优化离心速度（通常500-800rpm）以避免细胞变形。
将富细胞沉淀包埋于琼脂或石蜡中切片，适用于免疫组化检测（如TTF-1、P40表达分析），需注意离心后弃上清保留0.5ml液体以维持细胞完整性。
传统涂片法
液基细胞学技术（TCT/LCT）
细胞离心涂片（Cytospin）
细胞块制备
02
痰涂片制作规范
PART
痰标本采集要求（晨痰、漱口等）
晨痰采集
要求患者清晨起床后先漱口，清除口腔内食物残渣和细菌，再用力咳出深部痰液，确保标本来自下呼吸道而非唾液，以提高检测准确性。
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标本量要求
痰液量应≥2ml，呈脓性或黏液脓性，若为水样或泡沫状需重新采集，避免因标本质量不足导致假阴性。
漱口清洁
采集前需用无菌生理盐水或清水漱口3次，减少口腔上皮细胞和杂菌污染，避免干扰镜下观察结果。
即时送检
标本采集后需在1小时内送至实验室，若延迟需冷藏保存（2-8℃），但不得超过24小时，以防细胞自溶或细菌过度繁殖。
用另一张载玻片以30°角轻压痰液，快速平稳拉开，形成薄而均匀的涂片，避免反复涂抹导致细胞机械性损伤。
拉片手法
自然风干5-10分钟，不可加热或吹风加速干燥，以防细胞变形或破裂影响诊断。
涂片干燥
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将痰液倒入无菌平皿中，用竹签挑选脓性、血性或黏液部分，均匀涂抹于载玻片中央，厚度以透光性适中为宜。
标本预处理
在玻片磨砂端用铅笔标注患者信息，并与申请单严格核对，防止标本混淆或信息错误。
标记与核对
拉片法操作步骤
固定与送检注意事项
固定与送检注意事项
固定液选择
优先采用95%乙醇固定液，浸泡时间≥15分钟，可有效保存细胞形态并防止细菌污染；若用喷雾固定剂，需距离玻片20cm均匀喷洒。
固定时机
涂片制作后需立即固定，延迟超过1分钟可能导致细胞干燥变形，影响异型细胞的鉴别诊断。
送检包装
固定后的玻片需垂直放置于专用防震盒中，避免叠放或摩擦，同时附上完整申请单（注明临床病史和检查目的）。
生物安全防护
痰液可能含结核杆菌等病原体，操作者需戴N95口罩、手套，并在生物安全柜内处理高危标本，废弃标本需高压灭菌后处理。
03
粘膜及分泌物涂片制作
PART
妇科刮取物涂片（宫颈/阴道）
样本采集与处理
使用专用刮匙或刷子轻柔刮取宫颈或阴道粘膜表层细胞，避免出血或过度损伤。采集后立即将细胞均匀涂布于载玻片上，避免干燥或堆积。
固定与染色
涂片完成后需在10秒内浸入95%乙醇或喷淋细胞固定液，防止细胞退变。采用巴氏染色或HE染色，确保核质对比清晰，便于诊断。
质量控制
涂片应避免过厚或过薄，细胞分布均匀且无气泡。染色后需镜检评估细胞形态完整性及染色效果，不合格样本需重新制备。
内镜刷取物涂片（支气管镜/胃镜）
刷取操作规范
内镜刷取时需在病变区域多
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