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病理切片解读标准化培训

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目录

01

基础知识概述

02

关键染色技术解析

03

组织结构诊断方法

04

常见病理报告规范

05

典型病例实战分析

06

质控与能力提升

01

基础知识概述

病理切片类型与制备流程

石蜡切片

通过组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤制备，适用于常规病理诊断，可长期保存且组织结构清晰。需注意脱水时间与温度控制，避免组织收缩或硬化过度。

01

冰冻切片

快速冷冻组织后切片，用于术中快速病理诊断。操作需在-20℃以下环境完成，但组织细节保存较差，可能出现冰晶伪影，需结合临床需求权衡使用。

细胞学涂片

适用于体液或细针穿刺样本，通过离心、涂片、固定后染色观察。需避免细胞重叠或干燥变形，制片过程中需保持样本湿润并及时固定。

电镜切片

采用超薄切片技术（厚度50-100nm），需环氧树脂包埋和重金属染色，用于亚细胞结构观察。制备周期长且成本高，主要用于科研或特殊病例诊断。

02

03

04

染色技术原理（HE/特殊染色）

苏木精使细胞核呈蓝色（结合DNA/RNA），伊红使胞质和胶原纤维呈粉红色。染色质量取决于染液pH值、分化时间及水洗程度，需定期更换染液以避免沉淀干扰。

PAS染色通过高碘酸氧化糖原后与Schiff试剂反应呈紫红色，用于检测真菌或基底膜病变；Masson三色染色可区分胶原纤维（蓝绿色）与肌纤维（红色），用于评估纤维化程度。

基于抗原-抗体反应标记特定蛋白（如CK、ER），需优化抗体浓度、修复条件（热修复/酶修复）及封闭步骤，避免非特异性着色或假阴性结果。

利用荧光标记抗体或染料（如DAPI）定位目标分子，需避光操作并控制曝光时间，防止荧光淬灭影响信号强度。

HE染色（苏木精-伊红）

特殊染色（如PAS、Masson）

免疫组化染色

荧光染色

显微镜操作规范要点

确保光源中心对齐聚光镜孔径，调节聚光镜高度和光圈以获得均匀照明，避免眩光或阴影干扰视野，提升成像对比度。

光路调节与科勒照明

低倍镜（4×/10×）用于初步筛查，高倍镜（40×）观察细节，油镜（100×）需滴加镜油并避免气泡。切换物镜时注意避免镜头碰撞载玻片。

物镜选择与油镜使用

先粗调后微调焦距，高倍镜下使用微调旋钮避免压碎切片。拍摄时需平衡景深与分辨率，多层扫描可通过Z-stack技术重建三维结构。

焦距与景深控制

定期清洁镜头（用二甲苯去除镜油）、校准瞳距和屈光度，检查光源亮度及滤光片状态，确保色彩还原准确性和设备稳定性。

维护与校准

02

关键染色技术解析

核应呈深蓝色，胞质呈粉红色，染色不均或过深/过浅需重新制片。核仁清晰度、染色质分布状态是判断细胞活性的重要指标。

常规HE染色判读标准

细胞核与胞质对比度

观察组织层次（如上皮、间质、血管）是否保留完整，避免因切片过厚或固定不当导致的假象。

组织结构完整性

要求无染料沉淀、气泡或折叠，背景杂质可能掩盖微小病变（如原位癌灶）。

背景洁净度

特殊染色应用场景（如PAS、银染）

PAS染色（糖原与黏蛋白）

刚果红染色（淀粉样物质）

银染技术（网状纤维与病原体）

用于鉴别糖原贮积病、真菌感染（如念珠菌菌丝）及腺癌分泌的黏蛋白，需注意区分非特异性着色与阳性信号。

适用于肝纤维化分期（显示网状支架）、神经内分泌肿瘤（如嗜银颗粒）及幽门螺杆菌检测，需控制染色时间避免过度银沉积。

在怀疑淀粉样变性时，需结合偏振光观察苹果绿双折光特性，排除胶原纤维干扰。

阳性定位与强度

确保组织内对照区域（如正常上皮）呈预期阳性，避免假阴性（如CD3在淋巴细胞中的表达）。

内对照必要性

交叉反应排除

使用多种抗体验证（如CK7/CK20组合），并设置阴性对照（如省略一抗）排除非特异性结合。

明确靶蛋白表达位置（膜/浆/核），如ER/PR需核阳性，HER2需完整膜强阳性。采用半定量评分系统（如H-score或Allred评分）。

免疫组化结果判定原则

03

组织结构诊断方法

正常组织学特征识别

观察细胞极性、基底膜完整性及细胞间连接结构，如复层鳞状上皮的角化层与基底层分界清晰，腺上皮的腺腔结构规则。

上皮组织特征

识别胶原纤维排列、成纤维细胞形态及基质成分，如疏松结缔组织中血管与脂肪细胞的分布规律。

如肝小叶的中央静脉与门管区、肾单位的肾小球与肾小管的空间关系。

结缔组织特征

横纹肌的横纹结构、平滑肌的梭形细胞核排列，以及神经元的尼氏体与轴突突触结构。

肌组织与神经组织特征

01

02

04

03

器官特异性结构

炎性病变与肿瘤性病变区分

炎性病变标志

交界性病变鉴别

以中性粒细胞、淋巴细胞浸润为主，伴血管扩张、水肿及纤维增生，组织结构破坏但无克隆性增殖。

肿瘤性病变标志

细胞异型性明显（核质比增高、核分裂活跃），呈浸润性生长或形成肿块，免疫组化显示单克隆性标记物表达。