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2025年大学《化学测量学与技术》专业题库——定量测定转录因子DNA相互作用的新方法研究

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、

简述转录因子在基因表达调控中的作用及其与DNA相互作用的基本特征。

二、

比较紫外吸收法、荧光法、表面等离子体共振法（SPR）和等温滴定微量量热法（ITC）中至少三种用于测定转录因子-DNA相互作用亲和力的原理、优缺点及其适用场景。

三、

设计一个基于纳米材料增强的荧光传感方法，用于定量测定特定转录因子与目标DNA序列的相互作用。请阐述传感界面的构建思路、信号产生机制、影响测定灵敏度和选择性的因素以及如何通过实验优化提高方法的性能。

四、

在研究转录因子X与DNA靶点Y的相互作用时，研究者发现存在非特异性结合干扰。请列举至少三种提高该测定方法特异性（排除非特异性结合）的策略，并简述其基本原理。

五、

微流控技术在定量测定生物分子相互作用方面具有独特优势。请结合化学测量学原理，阐述微流控技术如何应用于构建高灵敏度、高通量的转录因子-DNA相互作用分析方法，并说明其优势所在。

六、

简述酶催化放大或信号放大纳米粒子（如金纳米颗粒）聚集/分散机制在增强转录因子-DNA相互作用定量测定中的应用原理，并举例说明其如何提高方法的检测灵敏度。

七、

定量测定转录因子-DNA相互作用的方法学性能通常用灵敏度（检测限LOD）、选择性、重现性等指标评价。请解释这些指标的含义，并说明在方法开发过程中应如何通过实验设计和数据处理来优化这些性能指标。

八、

设想一种基于分子印迹技术（MolecularImprinting）的定量分析方法，用于特异性识别和测定体液样本中与肿瘤相关的特定转录因子。请简述该方法的构建流程、工作原理及其在疾病诊断中的潜在应用价值。

九、

转录因子-DNA相互作用动力学信息（如结合/解离速率常数）对于理解基因调控机制至关重要。请描述一种利用化学测量学技术（如荧光光谱法、SPR法等）测定转录因子-DNA相互作用动力学的实验方法，并说明如何从实验数据中获取动力学参数。

十、

评价新型定量测定转录因子DNA相互作用方法（例如基于比色法、电化学法或新型光谱技术的）相比传统方法（如凝胶阻滞法）在灵敏度、特异性、实时性和应用便捷性等方面的优势与挑战。

试卷答案

一、

转录因子是能够结合特异DNA序列并调控基因转录活性的蛋白质。它们通过与靶基因启动子或增强子区域的顺式作用元件结合，招募或抑制转录机器（如RNA聚合酶），从而激活或抑制基因表达。转录因子与DNA相互作用具有高度特异性（序列特异性、结构特异性）和动态性（可逆性），其结合通常受细胞信号、环境条件和小分子调节剂的影响。特异性主要体现在识别DNA上的特定碱基序列和/或DNA碱基堆积、扭曲等二级结构。动态性则由结合和解离速率决定，反映了转录因子在基因调控网络中的瞬时调控能力。

二、

*紫外吸收法：基于DNA在260nm附近有强紫外吸收，而蛋白质吸收较弱。通过监测结合前后DNA紫外吸光度或吸光度的变化来定性或半定量分析相互作用。优点是仪器简单、成本较低；缺点是特异性差（易受盐浓度、pH等影响），灵敏度不高，主要用于判断结合发生而非精确定量亲和力。

*荧光法：利用荧光探针（如FRET探针、荧光蛋白）或检测荧光蛋白/探针与靶分子的相互作用引起的荧光强度变化（增强、猝灭、光谱位移）。优点是灵敏度高、选择性好、可实时监测、仪器相对普及；缺点是荧光信号易受背景荧光、光漂白、探针特异性等因素干扰，部分方法仍需优化以排除非特异性干扰。

*表面等离子体共振法（SPR）：基于分析物与固定在传感器芯片表面的配体发生相互作用时引起的折射率变化，实时监测并解算结合动力学参数（Ka,Kd,稳定常数Kd）和热力学参数。优点是可实时、原位、动力学监测，无需标记，可提供丰富信息（结合/解离曲线）；缺点是仪器昂贵，对缓冲液兼容性要求高，样品消耗较大。

*等温滴定微量量热法（ITC）：通过测量在恒定温度下，溶液中一种物质（配体）逐滴加入另一种物质（分析物）时释放或吸收的热量变化，直接解算结合热（ΔH）和亲和力常数（Ka,Kd）。优点是可直接获得热力学数据，信息丰富，适用范围广；缺点是仪器较昂贵，数据采集和拟合相对复杂，样品量通常较小。

三、

传感界面构建思路：将特异性识别转录因子的识别分子（如适配体、抗体、DNAzyme或直接使用转录因子本身）固定在具有高信号放大能力的纳米材料表面（如金纳米颗粒、碳纳米管、量子点或超分子聚合物）。信号产生机制：转录因子与固定化的识别分子结合后，可通过多种途径产生信号放大。例如，结合可诱导纳米粒子间的聚集/分散状态改变，导致比色信号（如银纳米粒）或荧光信号（如碳纳米管、量子点）发