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再生医学Westernblot分析师岗位考试试卷及答案
一、单项选择题（每题2分，共20分）
1.Westernblot实验中常用的封闭液是（）
A.PBSB.BSAC.Tris-HClD.Tween-20
2.转膜时，一般采用的是（）
A.正转B.反转C.半干转D.湿转
3.一抗孵育的温度通常是（）
A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃
4.检测蛋白质分子量常用的标记物是（）
A.荧光素B.辣根过氧化物酶C.同位素D.生物素
5.电泳缓冲液的主要成分是（）
A.甘氨酸B.氯化钠C.醋酸D.乙醇
6.样品在进行SDS前需要进行（）处理
A.离心B.超声C.变性D.过滤
7.Westernblot实验的基本原理是（）
A.抗原抗体特异性结合B.核酸杂交C.酶促反应D.离子交换
8.PVDF膜的优点是（）
A.亲水性好B.结合力强C.价格便宜D.易裁剪
9.显色底物DAB的颜色是（）
A.蓝色B.绿色C.棕色D.红色
10.实验中常用的内参蛋白是（）
A.GAPDHB.Bcl-2C.BaxD.p53
答案：1.B2.D3.A4.B5.A6.C7.A8.B9.C10.A
二、多项选择题（每题2分，共20分）
1.Westernblot实验中可能用到的仪器有（）
A.电泳仪B.转膜仪C.脱色摇床D.离心机
2.下列属于一抗选择要点的是（）
A.特异性B.效价C.来源D.稀释度
3.转膜过程中影响转膜效果的因素有（）
A.电流大小B.时间C.膜的类型D.缓冲液成分
4.SDS实验中，影响蛋白质迁移率的因素有（）
A.蛋白质分子量B.凝胶浓度C.电场强度D.缓冲液pH
5.封闭的目的是（）
A.减少非特异性结合B.增强抗体结合力C.保护膜D.提高显色效果
6.显色方法有（）
A.化学发光法B.底物显色法C.荧光显色法D.同位素显色法
7.实验中需要注意的安全事项有（）
A.防止触电B.避免接触有毒试剂C.防止烫伤D.防止放射性污染
8.蛋白质样品的制备方法有（）
A.组织匀浆法B.细胞裂解液裂解法C.超声破碎法D.研磨法
9.以下哪些是Westernblot结果分析的内容（）
A.条带位置B.条带强度C.条带数量D.条带颜色
10.实验中常用的缓冲液有（）
A.Tris-HCl缓冲液B.PBS缓冲液C.甘氨酸缓冲液D.柠檬酸缓冲液
答案：1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.AC6.ABC7.ABC8.ABC9.ABC10.ABC
三、判断题（每题2分，共20分）
1.Westernblot只能检测蛋白质的表达量。（）
2.转膜时间越长，转膜效果越好。（）
3.一抗可以反复使用。（）
4.SDS可以根据蛋白质的电荷和大小分离蛋白质。（）
5.封闭时间过长会影响抗体结合。（）
6.化学发光法比底物显色法更灵敏。（）
7.实验中使用的所有试剂都需要新鲜配制。（）
8.内参蛋白的表达量在不同样本中应相对稳定。（）
9.凝胶浓度越高，蛋白质迁移速度越快。（）
10.Westernblot实验可以检测蛋白质的修饰情况。（）
答案：1.×2.×3.√4.√5.×6.√7.×8.√9.×10.√
四、简答题（每题5分，共20分）
1.简述Westernblot实验的基本流程。
答案：首先制备蛋白质样品，进行SDS电泳分离蛋白质；然后转膜将蛋白质转移到膜上；接着封闭膜以减少非特异性结合；再加入一抗、二抗进行孵育；最后选择合适的显色方法显色并分析结果。
2.一抗和二抗的作用分别是什么？
答案：一抗能特异性识别目标蛋白，与目标蛋白结合。二抗则与一抗结合，通常带有标记物（如辣根过氧化物酶等），通过二抗与一抗结合，利用其标记物来实现对目标蛋白的检测，起到放大信号的作用。
3.转膜过程中需要注意哪些问题？
答案：要注意电流、电压、时间的设置，防止转膜过度或不足。选择合适的膜及缓冲液，保证膜与凝胶紧密贴合，避免产生气泡影响转膜效果。同时注意电极正负极不要接反。
4.分析Westernblot结果条带出现杂带的可能原因。
答案：可能是一抗特异性不佳，与非目标蛋白结合；封闭不充分，导致抗体非特异性结合在膜上；样品存在杂质或降解；二抗与其他蛋白质有交叉反应等原因造成。
五、讨论题（每题5分，共20分）
1.在Westernblot实验中，如果条带模糊不清，可能有哪些原因及解决方法？
答案：原因可能有抗体效价低、孵育条件不合适、显色底物失效等。解决方法：重新评估抗体，优化孵育温度、时间等条件；更换新鲜显色底物；检查转膜是否成功，适当调整转膜参数；也可能是样品上样量不足，可增加上样量。
2.如何提高Westernblot实验的重复性？
答案：严格控制实验条件，如试剂的来源、保存和使用方法一致；仪器参数设置稳定；样品制备方法标准化，保证样品的一致性；操作过
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