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再生医学蛋白质纯化工程师岗位考试试卷及答案
一、单项选择题（每题2分，共10题）
1.蛋白质纯化常用的层析方法不包括（）
A.离子交换层析B.凝胶过滤层析C.纸层析D.亲和层析
2.SDS主要用于（）
A.蛋白质定量B.蛋白质纯度鉴定C.蛋白质活性测定D.蛋白质等电点测定
3.超滤的主要作用是（）
A.去除小分子杂质B.分离不同分子量蛋白质C.去除色素D.浓缩蛋白质溶液
4.蛋白质在等电点时，其（）
A.溶解度最大B.溶解度最小C.电荷最多D.稳定性最好
5.以下哪种试剂可用于蛋白质定量（）
A.考马斯亮蓝B.二苯胺C.茚三酮D.斐林试剂
6.亲和层析中，与目标蛋白特异性结合的是（）
A.固定相B.流动相C.配体D.载体
7.凝胶过滤层析中，先被洗脱下来的是（）
A.分子量小的蛋白质B.分子量大的蛋白质C.电荷多的蛋白质D.电荷少的蛋白质
8.蛋白质纯化过程中，常用的缓冲液pH范围是（）
A.2-4B.5-7C.7-9D.9-11
9.离子交换层析的原理是基于蛋白质的（）
A.分子量差异B.等电点差异C.溶解度差异D.亲和力差异
10.透析的主要目的是（）
A.去除蛋白质溶液中的小分子杂质B.浓缩蛋白质溶液C.改变蛋白质的构象D.测定蛋白质的分子量
答案：1.C2.B3.D4.B5.A6.C7.B8.C9.B10.A
二、多项选择题（每题2分，共10题）
1.蛋白质纯化的方法有（）
A.盐析B.透析C.电泳D.离子交换层析E.亲和层析
2.影响蛋白质溶解度的因素有（）
A.温度B.pH值C.离子强度D.蛋白质浓度E.溶剂种类
3.以下属于蛋白质定量方法的有（）
A.凯氏定氮法B.双缩脲法C.福林-酚试剂法D.紫外吸收法E.Bradford法
4.亲和层析常用的配体有（）
A.抗体B.抗原C.酶的底物D.辅酶E.金属离子
5.凝胶过滤层析的应用包括（）
A.分离不同分子量蛋白质B.测定蛋白质分子量C.蛋白质脱盐D.蛋白质浓缩E.蛋白质复性
6.离子交换剂的种类有（）
A.阳离子交换剂B.阴离子交换剂C.两性离子交换剂D.非离子交换剂E.弱离子交换剂
7.蛋白质纯化过程中，可能用到的仪器有（）
A.离心机B.层析柱C.超滤设备D.透析袋E.移液器
8.蛋白质在纯化过程中可能出现的问题有（）
A.蛋白质变性B.蛋白质降解C.回收率低D.纯度不高E.活性丧失
9.蛋白质复性的方法有（）
A.稀释复性B.透析复性C.超滤复性D.柱上复性E.添加剂辅助复性
10.蛋白质纯度鉴定的方法有（）
A.SDSB.等电聚焦电泳C.HPLCD.质谱分析E.紫外光谱分析
答案：1.ABDE2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABC6.AB7.ABCDE8.ABCDE9.ABCDE10.ABCD
三、判断题（每题2分，共10题）
1.盐析法是通过改变蛋白质的溶解度来分离蛋白质的。（）
2.蛋白质在电场中移动的方向只取决于其分子量大小。（）
3.亲和层析的特异性很高，只适用于分离单一蛋白质。（）
4.凝胶过滤层析中，蛋白质的洗脱体积与其分子量呈线性关系。（）
5.离子交换层析中，缓冲液的离子强度对蛋白质的洗脱有影响。（）
6.透析可以完全去除蛋白质溶液中的所有小分子杂质。（）
7.蛋白质的等电点是固定不变的，不受外界因素影响。（）
8.Bradford法测定蛋白质含量时，蛋白质与考马斯亮蓝结合后颜色会发生变化。（）
9.超滤过程中，压力越大，蛋白质的浓缩效果越好。（）
10.蛋白质纯化过程中，为了提高回收率，可以不考虑纯度。（）
答案：1.√2.×3.×4.√5.√6.×7.×8.√9.×10.×
四、简答题（每题5分，共4题）
1.简述蛋白质纯化的一般步骤。
答案：一般步骤为样品预处理，去除杂质；采用盐析等初步分离方法进行粗分离；再通过层析技术如离子交换、亲和、凝胶过滤等进行精细分离；最后进行纯度鉴定和活性检测。
2.离子交换层析的原理是什么？
答案：基于蛋白质所带电荷与离子交换剂上的相反电荷基团间的静电吸附作用。不同蛋白质等电点不同，在特定pH缓冲液中所带电荷不同，与离子交换剂结合能力有差异，从而实现分离。
3.简述SDS的原理。
答案：SDS能使蛋白质变性并与蛋白质结合，赋予蛋白质均匀的负电荷，消除蛋白质原有电荷差异。在电场中，蛋白质按分子量大小在聚丙烯酰胺凝胶中迁移，分子量小的迁移快，从而分离鉴定蛋白质。
4.蛋白质纯化过程中如何防止蛋白质变性？
答案：控制温度在合适范围，避免高温；维持缓冲液合适的pH值，接近蛋白质稳定的pH区间；减少机械搅拌、超声等剧烈操作；添加保护剂如甘油、DTT等，防止蛋白质氧化和聚集。
五、讨论题（每题5分，共4题）
1.讨论亲和层析在再生医学蛋白质纯化中的优势与局限性。
答案：优势在于特异性强，能高效分离目标蛋
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