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再生医学蛋白质纯化技术员岗位考试试卷及答案

单项选择题（每题2分，共10题）

1.蛋白质纯化常用的层析方法不包括（）

A.离子交换层析B.凝胶过滤层析C.纸层析D.亲和层析

2.SDS主要用于（）

A.蛋白质定量B.蛋白质纯度分析C.蛋白质等电点测定D.蛋白质活性测定

3.以下哪种缓冲液常用于蛋白质纯化（）

A.磷酸缓冲液B.硼酸缓冲液C.盐酸缓冲液D.氢氧化钠缓冲液

4.蛋白质在电场中移动的方向取决于（）

A.蛋白质的分子量B.蛋白质的等电点C.缓冲液的pH值D.B和C

5.超滤的主要作用是（）

A.去除小分子杂质B.蛋白质浓缩C.去除盐离子D.分离不同电荷蛋白质

6.亲和层析的原理是利用蛋白质与（）之间的特异性相互作用。

A.配体B.抗体C.酶D.底物

7.蛋白质纯化过程中，检测蛋白质浓度常用的方法是（）

A.凯氏定氮法B.双缩脲法C.Bradford法D.酚试剂法

8.离子交换层析中，若要分离带正电荷的蛋白质，应选择（）

A.阳离子交换树脂B.阴离子交换树脂C.中性树脂D.两性树脂

9.凝胶过滤层析中，最先被洗脱下来的是（）

A.分子量小的蛋白质B.分子量大的蛋白质C.电荷多的蛋白质D.电荷少的蛋白质

10.以下哪种仪器常用于蛋白质纯化的检测（）

A.气相色谱仪B.高效液相色谱仪C.原子吸收光谱仪D.紫外可见分光光度计

答案：1.C2.B3.A4.D5.B6.A7.C8.A9.B10.D

多项选择题（每题2分，共10题）

1.蛋白质纯化的目的包括（）

A.获得高纯度蛋白质B.去除杂质C.测定蛋白质结构D.研究蛋白质功能

2.影响蛋白质在离子交换层析中保留时间的因素有（）

A.蛋白质的电荷性质B.缓冲液的离子强度C.缓冲液的pH值D.柱长

3.蛋白质纯化过程中可能用到的设备有（）

A.离心机B.层析柱C.超滤设备D.移液器

4.以下属于蛋白质沉淀方法的有（）

A.盐析B.有机溶剂沉淀C.等电点沉淀D.超滤沉淀

5.凝胶过滤层析的优点有（）

A.分离效果好B.回收率高C.操作简单D.可同时分离多种蛋白质

6.亲和层析中常用的配体有（）

A.抗体B.抗原C.酶的底物D.金属离子

7.蛋白质纯化过程中，对缓冲液的要求有（）

A.合适的pH值B.一定的离子强度C.不与蛋白质发生反应D.高浓度

8.高效液相色谱在蛋白质纯化中的应用包括（）

A.分析蛋白质纯度B.分离蛋白质异构体C.测定蛋白质分子量D.蛋白质定量

9.蛋白质纯化过程中的质量控制指标有（）

A.蛋白质浓度B.蛋白质纯度C.蛋白质活性D.蛋白质稳定性

10.以下哪些因素会影响蛋白质的稳定性（）

A.温度B.pH值C.离子强度D.氧化还原环境

答案：1.ABD2.ABC3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABCD7.ABC8.ABD9.ABCD10.ABCD

判断题（每题2分，共10题）

1.蛋白质纯化过程中，所有步骤都需要在低温下进行。（）

2.离子交换层析中，缓冲液的离子强度越高，蛋白质越容易被洗脱。（）

3.凝胶过滤层析只能分离不同分子量的蛋白质，不能测定其分子量。（）

4.亲和层析的特异性很强，所以不需要对样品进行预处理。（）

5.Bradford法测定蛋白质浓度时，受蛋白质种类影响较小。（）

6.超滤可以完全去除蛋白质溶液中的小分子杂质。（）

7.蛋白质的等电点是固定不变的。（）

8.盐析法沉淀蛋白质后，蛋白质的活性通常会丧失。（）

9.高效液相色谱可以实现蛋白质的快速、高效分离。（）

10.蛋白质纯化过程中，只要纯度达到要求，不必在意活性是否保留。（）

答案：1.×2.√3.×4.×5.√6.×7.×8.×9.√10.×

简答题（每题5分，共4题）

1.简述蛋白质纯化的一般步骤。

答案：通常先进行样品预处理，如细胞破碎、离心除杂等；然后选择合适的粗分离方法，像盐析、超滤等初步浓缩和去除大部分杂质；接着用层析技术如离子交换、亲和、凝胶过滤等进行精细分离；最后对纯化后的蛋白质进行纯度、活性等检测和鉴定。

2.离子交换层析的原理是什么？

答案：基于蛋白质所带电荷与离子交换树脂上的电荷基团相互作用。蛋白质在不同pH环境下带电情况不同，当带电荷蛋白质流经带相反电荷的离子交换树脂时，会发生静电吸附，改变缓冲液离子强度或pH值，可使蛋白质与树脂间的静电作用改变，从而实现不同蛋白质的分离。

3.简述亲和层析的优点。

答案：特异性高，能从复杂混合物中快速分离出目标蛋白质；分离效率高，可一步获得较高纯度的蛋白质；对蛋白质活性影响小，因为利用的是特异性亲和力，条件相对温和，有利于保持蛋白质天然构象和活性。

4.蛋白质纯化过程中，如何选择合适的缓冲液？

答案：首先要依据蛋白质的等电点选择合适pH值的缓冲液，使蛋白质处于稳定状态。同时，考虑缓冲液离子强度，避免过高或过低影响蛋白质性质。