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寄生虫病学粪便检查(二)

1.检查前准备与标本采集

1.1检查前准备

在进行寄生虫学粪便检查前，需做好充分的准备工作以确保检测结果的准确性。应向患者详细说明检查目的、注意事项及标本采集方法，消除患者的紧张情绪，确保其能够正确配合。检查人员需准备好无菌容器、标签、采集工具、个人防护装备等必要物品，并确保实验室环境符合生物安全要求。检查前应确认患者是否近期服用过抗寄生虫药物、抗生素或其他可能影响检测结果的药物，必要时需停药37天后再进行检测。

1.2标本采集方法

粪便标本的采集是寄生虫学检查的关键环节。采集时应使用清洁、干燥、无渗漏的容器，避免尿液、水或其他污染物混入。标本量应充足，一般需采集510g新鲜粪便，对于疑似寄生虫感染的患者，应采集不同部位的粪便样本以提高检出率。对于原虫检查，应采集含有黏液、血液或脓液的部分；对于蠕虫卵检查，应采集粪便的各个部位。标本采集后应立即送检，若不能及时送检，应置于4℃冰箱保存，但保存时间不宜超过24小时，以免影响寄生虫卵或原虫的形态学特征。

1.3标本运输与保存

粪便标本的运输与保存对检测结果有重要影响。标本采集后应尽快送至实验室，最好在1小时内完成检测。如需运输，应使用密封容器并置于保温箱中，避免温度剧烈变化。对于需要长期保存的标本，可采用10%福尔马

2.粪便直接涂片法

2.1生理盐水直接涂片法

生理盐水直接涂片法是最基本、最常用的粪便检查方法，适用于检测肠道原虫滋养体、蠕虫卵及幼虫。操作时，取少量新鲜粪便（约2mg）置于洁净载玻片中央，加一滴生理盐水，用牙签或竹签搅拌均匀，涂成直径约1.5cm的均匀薄层，厚度以能透过报纸文字为宜。涂片完成后，先用低倍镜（10×）镜检，发现可疑虫体或虫卵后，再转用高倍镜（40×）观察确认。该方法操作简便、快速，适用于急诊检查和大规模筛查，但对虫卵数量少的标本检出率较低，易出现假阴性结果。

2.2碘液染色涂片法

碘液染色涂片法主要用于检测原虫包囊，特别是贾第虫包囊和溶组织内阿米巴包囊。操作方法与生理盐水涂片法基本相同，

4.永久染色技术

4.1苏木素伊红染色法

苏木素伊红染色法（HE染色）是寄生虫学检查中最常用的永久染色方法之一，适用于原虫滋养体和包囊的详细形态学观察。操作时，将粪便涂片经甲醇固定后，依次用苏木素染液染色510分钟，水洗分化，再用伊红染液复染23分钟，经脱水、透明、封片等步骤制成永久标本。该方法能清晰显示原虫的核、胞质、包囊壁等结构，对溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫等原虫的鉴别诊断具有重要价值。HE染色标本可长期保存，便于教学研究和病例回顾，但染色过程耗时较长，需要严格掌握染色时间和分化程度。

4.2三色染色法

三色染色法是一种特殊的组织学染色技术，在寄生虫学检查中主要用于显示原虫包囊的内部结构和组织切片中的寄生虫。该方法使用三种染料：核固红染细胞核，亮绿染胞质和结缔组织，橙黄G染肌肉和胶原纤维。染色后的标本色彩对比鲜明，原虫包囊的核、胞质、拟染色体等结构呈现不同颜色，便于详细观察和鉴别。三色染色法对隐孢子虫、微孢子虫等微小原虫的显示效果尤为突出，是诊断这些原虫感染的重要辅段。但该染色方法操作复杂，染料配比和染色时间需要精确控制，技术要求较高。

4.3免疫荧光染色法

免疫荧光染色法结合了免疫学和荧光技术的优势，具有高特异性和高敏感性的特点，适用于检测粪便中的特定寄生虫抗原。操作时，将粪便涂片固定后，加入荧光标记的特异性抗体，经孵育、洗涤等步骤，在荧光显微镜下观察。若标本中存在目标寄生虫，会呈现特异性荧光。该方法对隐孢子虫、贾第虫等原虫的检测效果显著，特别适用于免疫缺陷患者和低感染度病例的诊断。免疫荧光染色法操作相对简便，结果判读客观，但需要荧光显微镜和特异性抗体试剂，成本较高，且可能出现非特异性荧光干扰，需要经验丰富的技术人员进行结果判读。

5.质量控制与结果判读

5.1室内质量控制

寄生虫学粪便检查的室内质量控制是确保检测结果准确可靠的重要环节。实验室应建立完善的质量控制体系，包括试剂质量控制、仪器设备维护、人员技术培训和标准化操作规程等方面。试剂方面，应定期检查染色液、浮聚液等试剂的有效性和稳定性，确保其符合检测要求；仪器设备方面，显微镜、离心机等设备应定期维护校准，保证其性能稳定；人员方面，技术人员应定期接受培训，掌握最新的检测技术和质量控制方法；操作规程方面，应制定详细的标准化操作流程，确保每个检测环节都有章可循。实验室还应定期开展内部质量评估，通过重复检测、盲样测试等方式评估检测结果的准确性和一致性。

5.2结果判读标准

寄生虫学粪便检查的结果判读需要严格遵循标准化的判读标准，确保诊断的准确性。对于原虫检查，应根据滋养体或包囊的形态、大小、核的数量和位置、运动特征等综合判断虫种；对于蠕虫卵检查，应根据虫卵