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纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法(K—B法)药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片,培养一段时间后测量抑菌圈大小,并根据相关解释标准进行结果分析,从而得出受试菌株药物敏感性的结论．

中文名

纸片扩散法药敏试验

临床意义

得出受试菌株药物敏感性的结论

目录

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基本信息

中文名

纸片扩散法药敏试验

临床意义

得出受试菌株药物敏感性的结论

试验原理

纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散,观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远,药物浓度越低抑菌能力越强,因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。

试验步骤

１。待测菌株接种物制备(１)通用情况:从过夜孵育的平板,优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4。5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0。5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC25９22大肠埃希菌(1—２）*101２CFU/mＬ浓度。(２）特殊情况：嗜血杆菌属(本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HＴＭ平板,直接接种4。５％生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0。５麦氏单位，使菌悬液中含有相当于AＴCC25922大肠埃希菌（1—2）*101２CFU/mＬ浓度。２.接种平板（1）调整好悬液的浊度后,用无菌棉签浸入悬液内,紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体,但也应适度。(２)用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部,均匀涂布,重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈,防止有流动的菌悬液,并使菌液涂布于整块平板的每个角落。（3）涂布菌液完成的平板,可在室温放置一会（3—5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。3。放置测试药敏纸片根据测试菌的不同,按照预先设定的分组,将抗菌药物纸片贴于已接种细菌的琼脂表面,每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备纸片必须分布均匀,两纸片之间圆心的距离不少于24mm,纸片边缘距离琼脂边缘不少于15mm。我室使用的MH平板直径为9０mｍ,放置不超过５块纸片.由于一些药物几乎是瞬间扩散的，因此,一旦纸片与琼脂表面接触就不能再移动位置，若位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片.4。孵育(1)通用情况：在放置好纸片后,１5分钟内,将MH琼脂倒置于号孵箱（35℃）中，孵育16~18小时(除外下面列出的需要延长孵育时间的情况)。嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和链球菌KB纸片法测试平板应放置于含有5％ＣＯ2的环境进行孵育。(2)延长时间培养:①测试苯唑西林、头孢西丁对葡萄球菌的敏感性时，孵育时间必须达到２４ｈ，才能满足对结果判断的要求。②测试万古霉素对金黄色葡萄球菌及肠球菌属的敏感性,孵育时间必须达到24小时。５。抑菌环直径测量（1)通用情况:35℃,经过１6～1８小时的孵育后,将贴有纸片的MH平板置于黑色不反光的背景上,采用游标卡