第十章核酸的生物合成讲课文档.pptVIP

第十章核酸的生物合成;半保留复制（semiconservativereplication）：在DNA复制时，亲代DNA的双螺旋先行解旋和分开，然后以每条链为模板，按照碱基配对原则，在这两条链上各形成一条互补链。这样，从亲代DNA的分子可以精确地复制成2个子代DNA分子。每个子代DNA分子中，有一条链是从亲代DNA来的，另一条则是新形成的。;第三页，共72页。;1957年Meselson及Stahl通过实验证实了半保留复制的模式。;1963年，Cairns用放射自显影的方式观察到大肠杆菌正在复制中的DNA，在用氚标记的胸苷复制近两代，放射自显影，未复制部分银密度低，由一条放射链和一条非放射链组成；已复制部分有一条双链是放射的，一条双链有一半是放射的。这证明大肠杆菌DNA是环状分子，以半保留方式复制。;1956年，Arthur??Kornberg首先从大肠杆菌中发现DNA聚合酶（DNA聚合酶Ⅰ）。

70－71年分离出Ⅱ和Ⅲ。

1999年发现Ⅳ、Ⅴ，涉及错误倾向修复;以四种dNTP为底物

需要模板指导

需要有引物3’-羟基存在

DNA链的生长方向是5’→3’

产物DNA的性质与模板相同;大肠杆菌DNA聚合酶;小片段/323aa;真核生物DNA聚合酶;DNA连接酶;DNA连接酶;DNA的合成是以四种三磷酸脱氧核糖核苷为底物的聚合反应，该过程除了需要酶的催化之外，还需要适量的DNA为模板，RNA（或DNA）为引物和镁离子的参与。

催化这个反应的酶也有多种，除DNA聚合酶外，还有RNA引物合成酶（即引发酶），DNA连接酶、拓扑异构酶、解螺旋酶及单链结合蛋白多种蛋白质因子参与。;DNA的复制拓扑异构酶;DNA的复制过程——复制的起始;DNA甲基化与DNA复制起始密切相关;DNA拓扑异构酶Ⅱ在复制起始部位将DNA引入负超螺旋。

DnaA蛋白辨认、结合于起始位点，并促使解链。

DnaB与DnaC复合物进入，生成引发前体，然后DnaB继续发挥解链的作用。

SSB与解开的单链结合，稳定和保护单链。

引物酶(DnaG)进入并与引发前体结合生成引发体（DnaB、DnaC蛋白、引物酶和DNA起始区）。

引发体中的引物酶催化NTP聚合，生成引物。

DNA拓扑异构酶(Ⅱ型为主)在解链前方理顺DNA链，松弛正超螺旋。;;DNA的复制起始过程说明;复制叉、滞后链、冈崎片段与不连续复制;;DNA的复制过程：半保留的半不连续复???;第二十三页，共72页。;其他DNA复制模式;端粒和端粒酶的发现;端粒;端粒酶(telomerase)

;爬行模型动画演示;PCR——多聚酶链式反应;PCR主要包括三个阶段;一种PCR反应体系;

94℃，预变性5分钟

94℃，变性1分钟

55℃，退火1分钟

72℃，延伸1分钟

最后一次72℃，延伸5分钟

30个循环;生物因素、物化因素均可导致DNA的损伤;DNA的损伤修复;错配复活(MismatchRepair);第三十六页，共72页。;直接修复（DirectRepair);O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶去除O6上的甲基;切除修复（ExcisionRepair）;第四十页，共72页。;;易错修复（Error-ProneRepair）;逆转录（ReverseTranscription);RNA模板;逆转录酶的酶学性质;第四十六页，共72页。;转录（transcription）;不对称转录;1960年发现。

全酶：α2ββ’σ，其中α2ββ’为核心酶，σ因子识别转录起始位点。

5’→3’聚合活性，无外切酶活性

合成起始不需引物;原核生物的转录起始;E.coli的启动子(promoter);开始转录;第五十三页，共72页。;原核生物转录的延伸过程;原核生物转录的终止;顺式作用元件（cis-actingelement）;反式作用因子（trans-actingfactor）;真核生物RNA聚合酶;真核生物转录启动;类别Ⅱ启动子;;POL-Ⅱ;真核生物转录终止;在转录中新合成的RNA往往是较大的前体分子，需要经过进一步的加工修饰，才转变为具有生物学活性的、成熟的RNA分子，这一过程称为转录后加工。主要包括剪接、剪切和化学修饰。;真核mRNA生物转录后加工;5’端加帽子结构;3’端加polyA尾;甲基化修饰;真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。;外显子、内含子与RNA的拼接;RNA拼接（splicing）;谢谢大家！