正常和肿瘤组织细胞的培养培训课件.pptVIP

正常和肿瘤组织细胞的培养;内容;不同组织细胞和器官的结构和功能、生长特性不同，在体外培养中所需的分离方法和生长条件也不同。;上皮细胞的体外培养;上皮细胞的基本特征：;体外培养的上皮组织细胞的生长生物学;2.体外培养上皮组织的生长与增殖特征;根据上皮组织分布的特性，位于体表或衬贴消化道、

呼吸道内等处的上皮组织，直接暴露或同外环境相接触，

组织本身带有各种病原微生物或受其污染的机会较多。

要求在组织取材时就严格灭菌；分离、种植、培养等诸多操作

步骤上都要设法消除可能会出现的微生物污染。

培养中所使用的各种液体，包括细胞保存液、分离液以及

培养基等需添加抗生素，抗生素浓度比其它组织培养高。;皮细胞依赖贴附于某种支持物上才能生长，即所谓的

贴壁依赖性细胞。

在培养器皿表面包被生长基质，如胶原或其它细胞外基

质成分等，模拟体内的基膜结构，不仅特别有利于上皮

细胞的贴附和生长，也有利于培养细胞的分化．使细胞

极性表现更为明显。;M199和RPMI1640培养基仅适用于上皮组织的短期培养和维持

其生存，对上皮组织的长期培养和促增殖作用并不明显。

DMEM和HamFl2培养基用于上皮组织培养时有其特殊作用。

可促进上皮细胞的贴附；维持上皮细胞在体外培养状态的分化。

HamFl2培养基的特殊性特别适用原代上皮细胞的培养，培养基

成分中添加微量元素的无机离子，更加利于细胞的生长和代谢。

在实际培养时，将DMEM与HamFl2按一定比例混合用于上皮组

织培养。;去除成纤维细胞

上皮组织借薄层基膜和结缔组织相连。取材分离细胞时

会带入少量结缔组织成分，常常造成成纤维细胞与上皮

细胞混和生长。由于成纤维细胞具有增殖能力和粘附能

力强的特点，很容易“疯长”为培养物中的优势细胞群，

从而干扰或抑制上皮细胞的生长，成为上皮细胞的

“细胞污染源”。

因此在上皮细胞的取材、分离、种植和传代的培养过程

中，要特别注意上皮细胞的纯化，去除和抑制成纤维细

胞的生长。;(2)体外培养上皮细胞的形态学变化;体外培养上皮组织细胞的观察与检测;2.组织化学与免疫组织化??观察与检测

酶类：

碱性磷酸酶

琥珀酸脱氢酶

特异性抗原标记物：

角蛋白、上皮细胞膜抗原

VIII因子、晶体蛋白、唾液酸糖蛋白;血管内皮细胞的体外培养;人脐静脉内皮细胞的培养;2.培养方法：

;1).?将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。

（注：4℃下最多贮存24小时，室温下不超过6小时，否则废弃）

2).?用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的

PBS溶液冲洗3-5次，将污血冲洗干净为止。

3).?用手术钳夹紧脐带下端，加入15ml的胶原酶（1mg/ml）室温下消化15-20分钟，并不时上下摇动脐带。

4).?消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50ml无菌离心管中，用无菌的PBS溶液冲洗脐带2-3次。

5).将收集液离心（2000转/分）3分钟，去上清，加入RPMI1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置CO2培养箱中培养，两至三天可见细胞长成单层。

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(1)关于接种材料的制备

取材与消化

消化酶、浓度、时间

(2)排除成纤维细胞

传代去除法

加肝素培养法(90u/ml)

刮除法

(3)关于培养液

(4)关于传代培养

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(1)光镜检查

(2)透射电镜检查：

W-P小体

(3)VIII因子相关抗原的免疫组化检测;肾小管上皮细胞的培养;1.主要材料：

a.细胞来源：

b.无血清培养液：

基础培养液：

DMEM/HamF12(1:1)

添加物：

胰岛素5?g/ml

转铁蛋白5?g/ml