基于Pull-down技术新型分子Arylquin 1诱导Par-4分泌机制研究.pdfVIP

基于Pull-down技术新型分子Arylquin 1诱导Par-4分泌机制研究.pdf

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近日,来自肯塔基大学的研究人员通过研究发现了一种名为

Arylquin1的新型分子,其可以作为正常细胞分泌Par-4的诱导子,

Par-4是一种抑制的蛋白质,在正常细胞未受时其可以有效

杀灭癌细胞,相关研究刊登于国际著名NatureChemicalBiology

上。

正常的细胞会分泌少量的Par-4分子,但是这种含量并不足以杀

灭癌细胞,而值得一提的是,如果Par-4的分泌被抑制就会促进

生长;文章中研究人员在利用培养基和动物模型进行研究揭示

了,低水平的Arylquin1分子在不损伤生产细胞(产生Par-4分子)

时,其会诱导Par-4分子的分泌。在文章中所描述的机制中发生反应

的过程中,其中用到了许多有关蛋白质纯化靶标确定的技术,

pull-down蛋白外融合实验,免疫共沉淀,WestenBlot等。许

多技术因为有前人的经验在本文中只是一带而过,故挑选本文有详尽

实验过程的pull-down技术来进行讲解。

蛋白质相互作用的类型有牢固型相互作用和暂时型相互作用两

种。牢固型相互作用以多亚基蛋白复合体常见,通过免疫共沉淀

(Co-IP)、Pull-down技术或Far-western法研究。

Pull-down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或蛋白(生物

素-、His-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白(对

混合液中的所有蛋白一视同仁)或者结合小分子。通过Pull-down技

术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白或相关小分

子间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用

Recently,researchersfromtheUniversityofKentucky

discoveredthroughresearchanewmoleculecalledArylquin1,

whichcanserveasaninducerfornormalcellstosecretePar-4.

Par-4isatumor-inhibitingproteinthatcaneffectivelykillcancer

cellswhennormalcellsarenotharmed.Relatedresearchwas

publishedintheinternationallyrenownedmagazineNature

ChemicalBiology.

NormalcellssecreteasmallamountofPar-4molecu,but

thiscontentisnotenoughtokillcancercells.Itisworth

mentioningthatifthesecretionofPar-4isinhibited,itwill

promotetumorgrowth.Inthearticle,researchersusedculture

mediaandanimalmodelstoconductstudiesinthelaboratory

andrevealedthatlowlevelsofArylquin1molecuwillinduce

thesecretionofPar-4molecuwithoutdamagingthe

productioncells(whichproducePar-4molecu).Intheprocess

ofreactioninthemechanismdescribedinthearticle,many

technologiesrelatedtoproteinpurificationandtarget

determination,p

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