微滴玻璃化超低温保存对怀菊花再生苗抗膜脂过氧化及遗传稳定性的影响.docxVIP

微滴玻璃化超低温保存对怀菊花再生苗抗膜脂过氧化及遗传稳定性的影响

一、引言

1.1研究背景与意义

怀菊花（Huaiqingchrysanthemum），作为菊科菊属植物，是中国传统名贵中药材，也是“四大怀药”之一，主要产于河南焦作地区。怀菊花富含挥发油、黄酮类、绿原酸、氨基酸、胆碱以及多种维生素和微量元素等成分，具有疏散风热、平抑肝阳、清肝明目、清热解毒等功效。现代医学研究表明，其在抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤以及对心血管系统的保护等方面具有显著作用。例如，怀菊花中的黄酮类化合物具有清除自由基、超氧阴离子的能力，抗氧化活性较强；其挥发油对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌等多种病菌均有一定的抑制作用。此外，怀菊花还被证实具有抗艾滋病作用，能抑制逆转录酶和HIV复制的活性。在临床上，怀菊花常被用于治疗风热感冒、目赤昏花、疮痈肿毒等病症，同时，因其药食两用的特性，在保健品、饮品、食品等领域也有着广泛的应用，市场需求持续增长。

目前，怀菊花的种植主要依赖传统的大田栽培方式。然而，这种方式易受到病虫害、自然灾害、气候变化等多种因素的威胁，导致种质资源的流失和品种的退化。此外，长期的无性繁殖也会使病毒在植株体内积累，影响怀菊花的产量和品质。据相关研究表明，因病虫害和自然灾害导致的怀菊花减产可达20%-30%，严重影响了种植户的经济收益和怀菊花产业的可持续发展。因此，寻找一种有效的种质保存方法对于怀菊花的保护和利用具有重要的现实意义。

超低温保存技术，通常是指将生物材料保存在液氮（-196℃）环境中，使细胞的新陈代谢活动基本停止，处于“生机停顿”状态，从而实现种质资源的长期稳定保存。该技术具有占用空间小、保存时间长、不易受外界环境影响等优点，已成为植物种质资源保存的重要手段之一。在过去的几十年里，超低温保存技术在多种植物上取得了成功应用，为怀菊花的种质保存提供了新的思路和方法。通过超低温保存怀菊花种质，可以有效地避免自然因素和人为因素对其种质资源的破坏，确保优良品种的遗传特性得以延续，为怀菊花的品种选育、遗传改良以及产业发展提供坚实的物质基础。

本研究聚焦于怀菊花超低温保存后再生苗的抗膜脂过氧化能力和遗传稳定性。抗膜脂过氧化能力是衡量植物在逆境条件下自我保护和适应能力的重要指标。超低温保存过程中，植物材料会受到低温、渗透压变化等多种胁迫，可能导致细胞膜脂过氧化，影响细胞的正常功能。深入研究再生苗的抗膜脂过氧化能力，有助于揭示超低温保存对怀菊花生理特性的影响，为优化超低温保存技术提供理论依据。而遗传稳定性则是保证超低温保存后怀菊花种质质量的关键。明确超低温保存是否会引起再生苗遗传物质的改变，对于评估超低温保存技术的可靠性和有效性至关重要。通过对再生苗遗传稳定性的研究，可以为怀菊花种质资源的长期保存和利用提供科学保障，推动怀菊花产业的健康、可持续发展。

1.2国内外研究现状

超低温保存技术自20世纪70年代首次成功应用于胡萝卜悬浮细胞的保存以来，得到了广泛的研究和应用。该技术的基本原理是利用液氮的极低温度，使生物材料的新陈代谢活动近乎停止，从而实现长期保存。在植物种质保存领域，超低温保存技术已取得了显著进展。许多植物的组织和器官，如原生质体、愈伤组织、体细胞胚、茎尖分生组织、芽、花粉等，都已成功实现超低温保存并再生植株。例如，在马铃薯和香蕉的种质保存中，超低温保存技术已成为主要的保存手段，全球范围内的主要野生种和品种都通过该技术得以长期保存。

在超低温保存技术的发展历程中，先后出现了多种冷冻方法。第一代技术主要通过程序降温诱导胞外结晶，使细胞缓慢脱水，从而在超低温下进入玻璃化状态，避免胞内结晶对细胞造成损伤，但该方法仅适用于耐冷植物。随着研究的深入，新一代的玻璃化超低温技术应运而生。该技术利用高浓度的植物玻璃化溶液处理细胞，在渗透脱水的同时，使低温保护剂进入细胞内部，改变细胞液体的热力学性质，从而在快速降温时实现胞内和胞外的玻璃化，有效保持细胞结构的完整和再生能力。这一技术的出现，大大拓展了植物超低温保存的范围，使得热带植物等对低温敏感的植物也能够实现超低温保存。

在怀菊花的超低温保存研究方面，国内起步相对较晚，但近年来取得了一定的成果。有研究建立了怀菊花种质资源超低温保存的实验模拟系统，通过模拟不同低温条件下对怀菊花种质资源的保存效果，发现在-140℃左右的温度下，玻璃化保护可有效保护怀菊花种质资源的完整性和活性，确定了超低温玻璃化保存技术对怀菊花种质资源的最佳工艺条件。还有研究以怀菊花中优良品种小黄菊为试材，成功建立了怀菊花的玻璃化超低温保存技术体系，并从形态、生理、同工酶和DNA等水平上对该体系进行了可行性研究。结果表明，玻璃化超低温保存后，再生的植株在形态、生理指标以及基因水平上均能很好地