土壤微生物量碳的测定、福建茶园土壤评价指标限值.pdfVIP

附录A（资料性附录）土壤微生物量碳的测定

A.1原理

新鲜土壤经氯仿熏蒸后（24h），壤微生物死亡细胞发生裂解,释放出的微生物量碳通过0.5mol/LKSO

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溶液提取后，用重铬酸钾－硫酸溶液进行氧化。反应结束后，用硫酸亚铁来滴定剩余的重铬酸钾，根据

所消耗的重铬酸钾量，计算得到有机碳量。根据熏蒸土壤和未熏蒸土壤测定有机碳量的差值及转换系数

(kEC)，从而计算土壤微生物量碳含量｡

A.2设备和材料

A.2.1天平：感量为0.01g和0.1mg。

A.2.2真空干燥器：直径22cm。

A.2.3聚乙烯离心管：200mL。

A.2.4消化管：150mL，24mm×295mm。

A.2.5冰箱：-20℃和4℃。

A.2.6水泵抽真空装置。

A.2.7油浴消化装置：包括油浴锅和铁丝网。

A.2.8可调温电炉：2000℃±1℃。

A.2.9烧杯：15mL、25mL

A.2.10聚乙烯离心管：80mL

A.3试剂

A.3.1无乙醇氯仿（CHCl）

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普通氯仿试剂一般含有少量乙醇作为稳定剂，使用前需除去。将氯仿试剂与蒸馏水按1:2（体积比）一

起放入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，重复洗涤3次。得到的无乙醇氯仿

加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。纯化后的氯仿置于暗色试剂瓶中，避光保存于4℃冰箱中。注意

氯仿具有致癌作用，必须在通风橱中进行操作。

A.3.2硫酸钾（0.5mol/L）溶液

称取硫酸钾（KSO）87.10g溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。

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A.3.3重铬酸钾（0.2000mol/L）标准溶液

称取经130℃烘干的重铬酸钾（KCrO，分析纯）9.8110g溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。

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A.3.4重铬酸钾（0.1000mol/L）标准溶液

称取经130℃烘干的重铬酸钾（K2Cr2O7，分析纯）4.9055g溶于蒸馏水中，稀释至1000mL。

A.3.5硫酸亚铁（0.05mol/L）溶液

称取13.9005g硫酸亚铁（FeSO·7HO，化学纯）溶于800mL蒸馏水中，慢慢加入浓硫酸5mL，在

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用蒸馏水稀释至1000mL，保存于棕色试剂瓶中。

此溶液易被空气氧化，需在每次使用前进行标定。标定方法：吸取0.1000mol/L标准溶液5.0mL于150

mL三角瓶中，加5mL浓硫酸和2滴邻啡啰啉指示剂，用硫酸亚铁溶液滴定至终点，根据所消耗的硫

酸亚铁溶液量计算其准确浓度,按式（A.1）计算：

M(A.1)

式中：

M——硫酸亚铁标准溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

C——重铬酸钾标准溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

V——吸取的重铬酸钾标准溶液体积，单位为毫升（mL）；

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V——滴到终点时消耗硫酸亚铁溶液体积，单位为毫升（mL）。

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A.3.6邻啡啰啉指示剂

称取1.49g邻啡啰啉溶于100mL0.7%分析纯硫酸亚铁溶液。密封保存于棕色试剂瓶中。

A.4操作步骤

A.4.1熏蒸

A.4.1.1称取过2mm筛的新鲜土壤20.0g于25mL烧杯中，置于真空干燥器中，同时一并放置盛有50mL

无乙醇氯仿的烧杯（烧杯内放入少量防爆沸玻璃珠）和盛有50mLNaOH溶液的烧杯（NaOH用以吸收熏

蒸过程中释放出来的CO），干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真

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空，使氯仿沸腾5min。关闭真空干燥器的阀门，于25℃黑暗条件下培养24h。

A.4.1.2熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全），取出盛有氯仿（可

重复利用）和NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5次或6次，每次3min，每次抽真空

后最好完全打开干燥器盖子），直至土壤无氯仿气味为止。同时，另称等量的3份