基因工程的理论基础与基本技术.pptVIP

④细菌的应急反应氨基酸饥饿空载tRNA鸟苷四磷酸（ppGpp）鸟苷五磷酸（pppGpp）关闭一些基因的表达开启氨基酸合成基因的表达生产各种RNA、糖、脂肪和蛋白质在内的几乎全部生物化学反应过程均被停止第30页，共48页，星期日，2025年，2月5日⑤环腺苷酸受体蛋白对转录的调控葡萄糖缺乏cAMP合成↑cAMP受体蛋白促进RNA聚合酶结合一些基因的启动子抑制RNA聚合酶结合一些基因的启动子第31页，共48页，星期日，2025年，2月5日总结基因工程操作中应注意的真核生物与原核生物的差异1.基因结构的差异2.启动子和RNA聚合酶的差异3.蛋白质的翻译后修饰加工（前体切割、二硫键、糖基化、甲基化、羰基化、磷酸化、乙酰化、硫酸化、丙烯酸化、豆冠酸化、软脂化）4.基因表达的调节（表达量）5.载体的差异6.蛋白质的纯化方便第32页，共48页，星期日，2025年，2月5日1．遗传密码与信息流

储存在DNA上的遗传信息通过mRNA传递给蛋白质，mRNA与蛋白质之间的联系是通过遗传密码的破译来实现的。mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为密码子，也叫三联子密码。蛋白质是通过遗传信息流由基因控制的。三基因研究进展第33页，共48页，星期日，2025年，2月5日2．结构基因和调节基因

结构基因(structuralgene)是可以转录成为各种RNA(如rRNA、tRNA、snRNA)直接行使功能，或者转录成信使RNA(mRNA)然后翻译成多肽链，最终形成各种功能蛋白质和酶。

从广义上讲，任何一种能够调节或限制其他基因活性的基因都可叫做调节基因(regulatorygene)，一般情况下则是指基因产物参与调节别的基因活性的基因(如阻遏基因等)。首先转录成mRNA，然后由mRNA翻译成阻遏蛋白质或激活蛋白质，通常也称为转录因子或反式作用因子。它们通常结合到结构基因的非编码区的顺式元件上起调控作用。第34页，共48页，星期日，2025年，2月5日基因工程的理论基础与基本技术第1页，共48页，星期日，2025年，2月5日第二章基因工程的理论基础与基本技术第2页，共48页，星期日，2025年，2月5日第一节基因工程的理论基础第3页，共48页，星期日，2025年，2月5日（一）原核生物的基因结构特点1.操纵子结构操纵子（Operon），由几个功能相关的结构基因成簇排列而组成的一个基因表达的协同单位（coordinatedunite），称为操纵子。一基因结构特点调节基因启动子操纵基因结构基因第4页，共48页，星期日，2025年，2月5日大肠杆菌乳糖操纵子第5页，共48页，星期日，2025年，2月5日色氨酸操纵子第6页，共48页，星期日，2025年，2月5日第7页，共48页，星期日，2025年，2月5日2.原核细胞mRNA的特征（1）半衰期短（2）多顺反子形式（3）存在SD序列原核生物中起始密码子AUG上游7～12个核苷酸序列因其与16SrRNA3’末端反向互补而被认为在核糖体-mRNA的结合过程中起作用。（4）起始密码子常为AUG（有时GUG，甚至UUG）。第8页，共48页，星期日，2025年，2月5日3.原核细胞基因的终止子根据对细菌和噬菌体DNA模板上的终止信号的分析，发现它们具有共同的结构特征：①终止点上游存在一个富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA容易形成发卡式结构；②在终止点前面有一段由4～8个A组成的序列，因此转录产物的3’端为寡聚U。UUUUUUUUUUUURNA第9页，共48页，星期日，2025年，2月5日（二）真核生物基因的结构特点1.真核生物基因的不连续性断裂基因（interruptedgene）第10页，共48页，星期日，2025年，2月5日内含子是一个基因中非编码DNA片段，它分开相邻的外显子。外显子是一个基因中编码蛋白序列。严格地说,外显子是指保留在初级mRNA中不被剪切掉的区域,包括5’非翻译区(5’UTR)、编码序列和3’非翻译区(3’UTR)。外显子-内含子连接区是指外显子和内含子的交界，又称边界序列。GT-AG法则序列分析表明，几乎每个内含子5’端起始的两个碱基都是GT，3’端最后两个碱基总是AG，由于这两个碱基的高度保守性和存在的广泛性，有人把它称为GT-AG法则，即：5’GT…AG3’