花青素合成调节基因DelRos1转化东方百合‘索邦’的分子机制与实践探索.docxVIP

花青素合成调节基因DelRos1转化东方百合‘索邦’的分子机制与实践探索

一、引言

1.1研究背景与目的

花青素作为植物中一类重要的水溶性色素，广泛存在于花卉、果实和蔬菜等植物组织中，对花卉的观赏价值和经济价值有着至关重要的影响。它不仅赋予花卉红色、蓝色、紫色等鲜艳多彩的颜色，吸引昆虫传粉，利于植物繁殖，还在植物抵御紫外线辐射、病原微生物侵害等方面发挥关键作用，同时对人类健康有益，具有抗氧化、抗炎、预防心血管疾病等功效。

百合作为世界著名的观赏花卉，深受人们喜爱。东方百合‘索邦’以其花型优美、花色淡雅等特点，在花卉市场中占据重要地位。然而，现有‘索邦’百合的花色相对单一，难以满足消费者日益多样化的需求。通过基因工程技术对其花色等性状进行改良，具有重要的研究意义和应用价值。

DelRos1基因是一种重要的花青素合成调节基因，在调控花青素合成途径中发挥关键作用。将DelRos1基因转化东方百合‘索邦’，旨在探究该基因对百合花色、花型等观赏性状以及生长发育、抗逆性等生理特性的影响，为百合的遗传改良和新品种培育提供理论依据和技术支持。

1.2国内外研究现状

在花青素合成调节基因的研究方面，国内外学者已取得丰硕成果。大量研究表明，植物花青素的合成受到一系列结构基因和调控基因的协同作用。其中，R2R3-MYB转录因子、bHLH转录因子以及WD40蛋白等是重要的调控基因，它们通过形成复合体，精确调控花青素合成途径中结构基因的表达，进而影响花青素的合成和积累。如在矮牵牛中，AN2、AN4等R2R3-MYB基因以及JAF13等bHLH基因对花青素合成起重要调控作用；在拟南芥中，TT2、TT8等基因也参与花青素合成调控。

在百合遗传转化研究方面，自1992年Cohen等利用农杆菌介导法成功对百合进行遗传转化以来，百合的遗传转化研究取得诸多进展。农杆菌介导法因操作简便、转移DNA片段明确、外源基因插入多为单拷贝或低拷贝等优点，成为目前应用最广泛的百合遗传转化方法。然而，百合基因工程起步较晚，仍存在诸多问题。目前稳定、高效表达的基因多为报告基因，多数基因仅获得瞬时表达，百合的遗传转化体系尚不完善，影响转化率的因素研究不够深入，转化效率较低，限制了百合基因工程的发展。

当前关于DelRos1基因转化百合的研究较少，对其在百合中的调控机制和功能了解有限。已有的百合遗传转化研究主要集中在少数基因和品种，且转化效率和稳定性有待提高，缺乏对转化后百合综合性状的系统研究。

1.3研究意义

从理论层面来看，将DelRos1基因转化东方百合‘索邦’，有助于深入揭示该基因在百合中的调控机制，进一步丰富和完善植物花青素合成的分子调控理论，为理解植物花色形成的遗传基础提供新的视角和依据，促进植物发育生物学和遗传学等学科的发展。

在实践应用方面，本研究成果可为百合花色改良育种提供重要的技术手段和理论支持。通过导入DelRos1基因，有望培育出花色更加丰富、艳丽的百合新品种，满足市场对多样化花卉品种的需求，提高百合的观赏价值和经济价值，推动百合花卉产业的可持续发展；同时，遗传转化技术的优化和完善，也将为其他花卉的遗传改良提供借鉴和参考，促进整个花卉产业的技术进步。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

本实验选用东方百合‘索邦’作为植物材料。从市场购买健康、无病虫害的东方百合‘索邦’种球，将其置于实验室中进行预处理。先用流水冲洗种球表面的泥土和杂质，再用70%酒精浸泡30-60s进行表面消毒，然后用0.1%升汞溶液消毒15min左右，最后用无菌水冲洗5-6遍，以确保种球表面无菌。

将消毒后的种球在无菌条件下，剥取鳞片，切成约1cm×1cm大小的小块，接种到MS+2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA的培养基上，进行诱导培养，获得无菌苗鳞片。培养条件为温度25±2℃，光照强度2000-3000lx，光照时间16h/d。

东方百合‘索邦’无菌苗鳞片作为受体材料具有诸多优势。其再生能力强，在合适的培养基和培养条件下，易于诱导产生愈伤组织和不定芽，为遗传转化提供了良好的基础；且鳞片取材方便，对植株的损伤较小，有利于后续的实验操作和植株的保存与繁殖。

2.1.2菌株与载体

携带DelRos1基因的农杆菌菌株为LBA4404，该菌株具有较强的侵染能力和转化效率，在植物遗传转化研究中应用广泛。表达载体为pBI121-DelRos1，其构建过程如下：首先从含有DelRos1基因的供体材料中，通过PCR技术扩增出DelRos1基因片段，然后将该片段与经过酶切处理的pBI121载体进行连接