第一章分子克隆技术概述.pptVIP

第1页，共34页，星期日，2025年，2月5日本课程的主要内容分子克隆概述基因克隆工具酶基因克隆载体和宿主目的基因的分离基因克隆操作过程基因克隆的策略目的基因在宿主中的表达第2页，共34页，星期日，2025年，2月5日参考书目资料《分子克隆实验指南》（第三版）：美J.萨姆布鲁克等著,黄培堂等译，科学出版社，2008.《GeneIX》：BenjaminLewin编著.《基因工程原理》：吴乃虎，科学出版社，1998.《分子生物学实验指导》：郜金荣，叶林柏，武汉大学出版社，2007.《基因工程》：张惠展，华东理工大学出版社，2005.生物网址通：/螺旋网：/bbs/生命科学论坛：/bbs/index.php丁香园：/bbs/index.html第3页，共34页，星期日，2025年，2月5日第4页，共34页，星期日，2025年，2月5日第5页，共34页，星期日，2025年，2月5日课程考核方式考试要求：闭卷笔试考试目的：测评运用分子克隆技术原理设计实验解决实际问题的能力总评成绩：考试成绩（80%）平时成绩（20%，课堂+考勤）第6页，共34页，星期日，2025年，2月5日第一章分子克隆技术概述第7页，共34页，星期日，2025年，2月5日一、基本概念基因从化学上说，指的是一段DNA或RNA序列，该序列可以产生或影响某种表型（phenotype）；从遗传学上说，基因代表一个遗传单位，一个功能单位，一个突变单位。第8页，共34页，星期日，2025年，2月5日第9页，共34页，星期日，2025年，2月5日分子克隆技术又称为重组DNA技术，是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序。供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。第10页，共34页，星期日，2025年，2月5日基因工程（geneticengineering）基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。基因工程的基本特点是，分子水平操作，细胞水平表达。第11页，共34页，星期日，2025年，2月5日第12页，共34页，星期日，2025年，2月5日第13页，共34页，星期日，2025年，2月5日我们应该记住他们——1.第一个实现DNA重组的人－Berg1972年，Berg用E.coRⅠ切割SV40DNA和λphageDNA，经过连接组成重组的DNA分子。Berg是第一个实现DNA重组的人。2.第一个取得基因工程成功的人－Cohen1973年，CohenGroup将E.coli的tetr质粒psclol和nersrR6-3质粒进行体外限制酶切割，并连接成一个新的质粒，转化E.coli，在含四环素和新霉素的平板上筛选出了terrNer的转化子,实现了细菌遗传性状的转移。这是基因工程史上的第一个克隆并取得成功的例子，这一年被定为基因工程诞生的元年。第14页，共34页，星期日，2025年，2月5日PscloltetrRb-3nersrtetrnertetrnerOtetrnerCohenGroup第一次实现了细菌遗传性状转移示意图第15页，共34页，星期日，2025年，2月5日二、分子克隆技术的理论基础19世纪中孟德尔豌豆杂交试验确定遗传因子20世纪初摩尔根果蝇杂交实验确定基因20世纪40年代，Avery发现了生物遗传物质的化学本质是DNA20世纪50年代，Watson-crick提出了DNA结构的双螺旋结构模型，揭示了生物遗传物质的分子机制20世纪60年代，确定了遗传信息的传递方式：DNA→RNA→Protein,破译了全部遗传密码第16页，共34页，星期日，2025年，2月5日三、分子克隆的技术准备1．“基因剪刀”－限制性内切酶的发现（1）20世纪40－60年代，科学家们就为基因工程设计了美好的蓝图，但是面对庞大的dsDNA束手无策，无从下手把它切成单个基因片断。（2）当时的酶学知识已有相当的发展，但是没有一个已发现的酶能完成这样的使命。