层析和膜技术在生物制药中的应用.pptVIP

金属螯合亲和层析柱的制备：将环氧活化型Sepharose6B与金属螯合剂（如亚氨二醋酸）偶联成配基，再用金属离子溶液处理（如Zn2+、Cu2+、Co2+、Ni2+、Cd2+），即成。第29页，共50页，星期日，2025年，2月5日金属螯合亲和层析

上样：柱子经平衡后，可将含有生物活性物质的样品上柱，与固定化的金属配基复合物有亲和力的分子都将被滞留，其余则流出柱外。洗脱：可通过改变盐的浓度、改变pH、或由竞争性的试剂将蛋白质置换下来，这些方式的机理都是通过降低固定化金属离子和蛋白质之间的亲和常数。第30页，共50页，星期日，2025年，2月5日金属螯合亲和层析的应用:

利用含汞树脂分离谷胱甘肽谷胱甘肽中的半胱氨酸含有巯基，巯基化合物与汞具有很强的化学亲和作用，因此用含汞树脂提取含巯基化合物能取得很好的效果。谷胱甘肽多从酵母中提取，也可从啤酒生产的废酵母中提取。酵母的提取液中除了含谷胱甘肽外，还含有其他含巯基的氨基酸和短肽，含汞树脂对这些物质也有一定的吸附。可通过调节酵母提取液的pH值，改变树脂对各种杂质成分的吸附力，以达到分离的目的。第31页，共50页，星期日，2025年，2月5日有机染料亲和层析

基本原理：一些有机染料如蒽醌化合物和偶氮化合物具有类似于NAD+的结构，因此一些需要核苷酸类物质为辅酶的酶，对这些染料有一定的亲和力，如果这些染料作为配基共价偶联到纤维素或琼脂糖等多糖载体上，就能制得染料亲和层析柱。常用的有机染料有二羟偶氮复合物。有机染料亲和层析已成功地分离纯化了多种酶，以及应用于白蛋白、脂蛋白和干扰素等的分离。第32页，共50页，星期日，2025年，2月5日有机染料亲和层析应用：

苯丙氨酸脱氢酶的纯化苯丙氨酸脱氢酶的纯化应用了有机染料亲和层析法。将一种模拟生物的染料配基（商品名：ProcionRedHE-3B）,结合在SepharoseCL-4B上。ProcionRedHE-3B与依靠NAD/NADH作辅酶的酶有特异性的结合，因而在分离这种类型的酶时，应用很广。第33页，共50页，星期日，2025年，2月5日有机染料亲和层析应用：

苯丙氨酸脱氢酶的纯化将含有苯丙氨酸脱氢酶的酶提取液上柱，亲和柱专一性地吸附苯丙氨酸脱氢酶。然后，用平衡缓冲液洗去杂蛋白，再用1mmol/L的NADH（配于平衡缓冲液中）将酶洗脱下来。经过这种方法纯化的酶，纯度达到单一区带，达到了诊断用酶制剂的纯度要求。苯丙氨酸脱氢酶可作为诊断试剂，用于测定和监测遗传性代谢疾病苯丙酮酸尿。作为诊断用酶制剂的市场很大。第34页，共50页，星期日，2025年，2月5日四.膜分离技术膜分离的概念：利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分离的一种技术。第35页，共50页，星期日，2025年，2月5日第1页，共50页，星期日，2025年，2月5日一.离子交换层析技术定义：利用溶液中各种带电颗粒与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离的操作称离子交换法。离子交换剂由惰性的不溶性载体，功能基团和平衡离子组成。平衡离子带正电荷的为阳离子交换剂，平衡离子带负电荷的为阴离子交换剂，可见离子交换剂是一类具有活性基团的荷电固相颗粒。第2页，共50页，星期日，2025年，2月5日离子交换层析技术离子交换反应：离子交换剂与交换离子间的作用是由静电引力而产生的，是一个可逆的反应过程，当这个反应达到动态平衡时，其平衡点随着pH、温度、溶剂的组成及交换剂本身性质的改变而变化。例如，向平衡体系中加入过量的X+离子，反应倾向于生成R-SO3-X+。第3页，共50页，星期日，2025年，2月5日离子交换层析技术由于待分离的溶质分子带有不同性质的电荷和不同电荷量，因而在作为固定相的离子交换剂和流动相的洗脱液之间发生可逆交换作用，并通过调节pH值、或改变同性离子的浓度等方法，使溶质分子移动的速度发生变化，从而达到分离的目的。第4页，共50页，星期日，2025年，2月5日离子交换层析的应用如庆大霉素，小诺霉素的提炼，应用了离子交换技术。第5页，共50页，星期日，2025年，2月5日庆大霉素的提炼酸化的目的在于将庆大霉素从菌丝体中释放出来，然后为了便于离子交换，将酸化液中和，再于中性溶液中投入732强酸性阳离子树脂。因为庆大霉素属于碱性抗生素，系有机碱，能与多种酸成盐，在水溶液中以离子状态G+存在，可以为阳离子树脂所吸附，对吸附了庆大霉素的732树脂进行洗涤，先用稀酸洗至无Ca2+、Mg2+，接着用无盐水洗