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探究siRNA干扰HBx基因对HepG2.2.15细胞迁移的分子机制及临床意义

一、引言

1.1研究背景与意义

1.1.1HBV感染与肝癌的关联

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一个全球性的公共卫生问题。据世界卫生组织（WHO）报道，2019年全球约有3.16亿慢性乙肝感染者，82万人死于HBV感染所致的肝硬化、肝细胞癌或肝衰竭等相关疾病。中国是HBV感染的高流行区，尽管近年来通过广泛接种乙肝疫苗等措施，HBV感染率有所下降，但2020年中国一般人群（1-69岁）乙肝表面抗原（HBsAg）流行率仍为5.86%，预估共有7500万人感染HBV。

长期的HBV感染是导致肝癌发生的主要危险因素之一，约85%的原发性肝癌患者存在慢性乙肝感染。HBV导致肝癌的机制较为复杂，一方面，HBVDNA可整合到宿主肝细胞基因组中，这种整合可能会引起宿主基因的突变、缺失或重排，从而激活原癌基因、促使抑癌基因突变，导致细胞的恶性转化。另一方面，HBV感染引发的持续肝脏炎症和免疫反应，会促使肝脏发生纤维化、肝硬化，而肝硬化阶段肝细胞的无序生长，大大增加了肝细胞恶变的几率。此外，在乙肝的治疗过程中，一些致癌物如黄曲霉毒素、酒精以及药物的副作用等，也可能协助乙肝病毒完成肝癌发生的进程。由于HBV感染相关肝癌的高发病率和高死亡率，深入研究HBV相关基因在肝癌发生发展中的作用机制，对于开发新的治疗策略、改善患者预后具有重要意义。

1.1.2HBx基因在肝癌发展中的作用

HBx基因是HBV基因组中最小的一个开放阅读框，编码的HBx蛋白虽然仅由154个氨基酸组成，但却具有多种生物学功能，在肝癌的发生、发展过程中扮演着关键角色。

在肝癌细胞增殖方面，HBx可以通过激活多条信号通路来促进细胞的增殖。例如，HBx能够激活Ras-Raf-MEK-ERK信号通路，该通路是细胞增殖和存活的重要调节途径，被激活后可促进细胞周期进程，使细胞从G1期进入S期，从而加速细胞的增殖。HBx还可以上调细胞周期蛋白（如CyclinD1）及其相关基因的表达，直接促进细胞的增殖。

对于肝癌细胞的迁移和侵袭，HBx也发挥着重要作用。它可以通过抑制钙黏蛋白E（E-cadherin）的表达，使细胞与细胞之间的粘附性降低，从而有利于癌细胞的迁移和侵袭。HBx还能够激活基质金属蛋白酶（MMPs）的表达，MMPs可以降解细胞外基质，为癌细胞的迁移和侵袭开辟道路。

HBx在肿瘤微环境的调控中也具有重要作用。它可以诱导炎症因子和趋化因子的表达，如白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等，这些因子可以招募免疫细胞到肿瘤部位，营造一个有利于肿瘤生长和转移的微环境。此外，HBx还可以调节肿瘤血管生成，通过上调血管内皮生长因子（VEGF）等血管生成因子的表达，促进肿瘤血管的生成，为肿瘤细胞提供充足的营养和氧气，支持肿瘤的生长和转移。鉴于HBx基因在肝癌发展中的多方面重要作用，其有望成为肝癌治疗的一个重要靶点。

1.1.3RNA干扰技术的应用

RNA干扰（RNAi）是一种在动植物中广泛存在的、由双链RNA（dsRNA）诱发的、同源mRNA特异性沉默的过程。其作用机制主要包括起始阶段和效应阶段。在起始阶段，长dsRNA进入细胞后被核酸酶Dicer切割成21-23个核苷酸组成的小干扰RNA（siRNA）；在效应阶段，siRNA与体内一些酶和蛋白质结合形成RNA诱导沉默复合体（RISC），RISC中的siRNA会识别并结合与其互补的靶mRNA序列，然后在核酸酶的作用下将靶mRNA降解，从而实现对特定基因表达的抑制，导致转录后基因沉默。

RNAi技术具有诸多优势，与传统的基因剔除技术相比，它具有投入少、周期短、操作简单等特点，尤其适用于那些难以获得突变体的基因或生物体的研究，为基因功能的研究开辟了新的途径。在癌症研究领域，RNAi技术得到了广泛的应用。例如，可以通过RNAi技术抑制癌基因、生长因子及其受体的过表达，从而抑制癌细胞的生长；干扰细胞周期蛋白及其相关基因的表达，以抑制癌细胞的增殖；靶向耐药基因，克服肿瘤细胞的耐药性，提高肿瘤治疗效果。在HBV相关研究中，RNAi技术为深入探究HBV相关基因的功能提供了有力工具。通过设计针对HBx基因的siRNA，可以特异性地抑制HBx基因的表达，从而研究其对肝癌细胞生物学行为的影响，为肝癌的治疗提供新的理论依据和潜在的治疗策略。

1.2研究目的

本研究旨在利用RNA干扰技术，通过设计并合成针对HBx基因的siRNA，转染H