第六章兽药残留检测技术抗生素类.pptVIP

3、液相色谱法氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考都有很强的紫外吸收,因此可直接用HPLC/μV检测。分析柱多采用C18或C8柱。一般来说C8柱用于分析那些在C18柱上不能很好保留的化合物。由于C18柱可以很好地分离氯霉素和甲砜霉素,因此C18柱应用更广,流动相主要是甲醇或乙腈与磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液。氯霉素的检测波长可选择214nm、254nm或278nm。在214nm氯霉素的检测灵敏度最高,但样品提取液的色谱图上会有许多内源性化合物的干扰峰,在278nm检测氯霉素时干扰峰较少。甲砜霉素和氟苯尼考在224nm、225nm或230nm进行检测。第61页，共94页，星期日，2025年，2月5日LC法测定猪肌肉中氯霉素试样中加入乙酸乙酯,超声提取,加入无水硫酸钠脱水,加入适量正己烷,过硅胶柱净化,用少量正己烷淋洗,再用甲醇洗脱氯霉素,洗脱液浓缩至干后用流动相溶解,进样分析,色谱柱为Li-ChromspherC18柱(100mm×3.0mm,5μm),流动相为乙酸钠缓冲液(0.01mol/L,pH4.3)-乙腈(75+25),检测波长280nm,样品添加浓度10~50μg/kg的平均回收率为79%。第62页，共94页，星期日，2025年，2月5日采用柱切换技术,反相色谱法测定猪肾中氯霉素残留量样品用乙醚提取,提取液用氮气吹干,加入2mL乙腈和3mL石油醚溶解残余物,乙腈相吹干后,残余物用流动相溶解,进样。第一柱为Li-ChromspherC18柱(100mm×3.0mm,5μm),第二柱为PRP-l柱(100mm×3.0mm,5μm),检测波长280nm,流动相为乙腈-水(90+10),方法检测限小于0.01μg/g,添加浓度在125μg/kg时的回收率为狃41.7%。第63页，共94页，星期日，2025年，2月5日LC法测定黄鳝肉中氟苯尼考胺(FFA)的残留量样品先酸解(样品酸解可以将氟苯尼考及其代谢物转化为FFA,并从组织中释出),然后用乙酸乙酯提取,碱化后过固相萃取柱,C18柱分离,紫外检测,样品添加浓度在0.075~35μg/g的回收率为85.7%~92.3%,相对标准偏差4.8%~17.2%,检测限0.044μg/g。第64页，共94页，星期日，2025年，2月5日LC-MS/MS法测定奶制品中氯霉素残留量样品经液-液提取,固相萃取柱净化后进样,负离子电喷雾电离,MRM检测。由于氯霉素分子中有两个氯原子,因此NIRM选择4对离子对:m/z321→257,321→152(35Cl2)和323→257,323→152(37C135Cl),虽然m/z321→152的检测响应比其他离子对高,但基质对它有干扰,故选择仍m/z321→257作为定量离子对,添加水平在0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.5μg/kg时,回收率和精密度符合欧盟残留检测的要求,测定限和测定能力分别为0.03μg/kg和0.05μg/kg。第65页，共94页，星期日，2025年，2月5日四、大环内酯类和林可霉素类大环内酯类(Macrolides)是一类具有14~16员大环的内酯结构的弱碱性抗生素,天然制品由链霉菌培养液中获取,经半合成改造可制得许多新型品种(图10-1)。自1952年发现代表品种红霉素以来已陆续有竹桃霉素、螺旋霉素、吉他霉素、麦迪霉素、交沙霉素及它们的衍生物问世。并出现动物专用品种如泰乐菌素、替米考星等。第66页，共94页，星期日，2025年，2月5日（二）分析方法生物样品中四环素药物的含量测定方法,除有微生物测定外,主要还有荧光分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等。第29页，共94页，星期日，2025年，2月5日1、荧光分光光度法四环素类抗生素本身在0.1mo1/L盐酸液中有微弱荧光,若将它们转变为脱水物,能使荧光强度增强。若在一定pH条件下,使脱水物与铝盐络合,形成的络合物具强烈荧光,可用于含量测定。由于本法灵敏度高(0.1mg/L),线性范围在0~5mg/L间,适用于血浆中四环素类抗生素的测定。第30页，共94页，星期日，2025年，2月5日血浆中四环素的测定取血浆2.0mL,加1.5mol/L三氯醋酸液0.6mL,振摇,离心(3500r/min)5min,取上层液1.6mL,加0.lmol/L盐酸液0.5mL,某中含有β-硫代丙酸1.0g/L;溶液于100℃加热10min后,立即将试管浸入冷水中冷却,加pH6.0枸橼酸缓冲液(1L溶液中含枸橼酸125g和10mol/L氢氧化钠液160mL)1.0mL,然后加0.75mol/L三氯化铝液0.5mL,振摇并在室温放置15min,于485nm处激发,555nm处检测