《食品生物技术》第三章 基因克隆的质粒载体.pdfVIP

ChapterⅢVectors

Vector：

通常把能携带外源基因进入受体细胞的运载

工具成为基因载体。

Therearecertainessentialfeatures

thatvectorsmustpossess:

ShouldbefairlysmallDNAmolecules

Anoriginofreplication

Selectablemarker

Haveatleastoneuniquerestriction

endonucleaserecognitionsite

Security＆stability

Cloningvectorclassification:

Fromthesource：

Plasmidvector

Virusorbacteriophagevector、

Cosmid(质粒DNA和病毒/噬菌体DNA组成的黏粒)

Artificialchromosome(质粒DNA和染色体DNA片

段组成的人工染色体)等。

Fromtheapplicationobject：

Cyanobacteriavector、Prokaryotesvector、

Eukaryoticvector、Plantvector、Animal

vector

PlasmidDNA

MolecularstructureofplasmidDNA

ClassificationofplasmidDNA

①Sexplasmid(F质粒、F因子)

②Rplasmid（抗药性因子）

③Colplasmid（大肠杆菌素因子）

Plasmidscanbeclassifiedintotwo

groups:

Conjugativeplasmid，（接合型的质粒）

canmediatetheirowntransfer

betweenbacteriabytheprocessof

conjugation,whichrequiresfunctions

specifiedbythetra(transfer)and

mob(mobilising)regions。

non-conjugativeplasmid（非接合型的

）

质粒，notself-transmissible

Afurtherclassificationisbasedon

thenumberofcopies:

）

stringentplasmid（严紧型1～3.

）

relaxedplasmid（松弛型10～60.

质粒拷贝数,是指生长在标准的培养基条件下，

每个细菌细胞中所含有的质粒DNA分子的数

。

目

Plasmidincompatibility

plasmidincompatibility（质粒的不

），是指在没

亲和性，有时也称为不相容性

有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的

不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳

定地共存的现象。在细胞的增殖过程中，其

中必有一种会被逐渐地排斥（稀释）掉。这

样的两种质粒称为不亲和质粒。

Plasmidincompatibility

PlasmidDNAIsolationand

Purification

应用质粒作为基因克隆的载体分子，一个重要的条

件是要获得批量的纯化的质粒DNA分子。我们通常

（

是加入溶菌酶或十二烷基硫酸钠SDS）来促使大

肠杆菌细胞裂解的，绝大部分的染色体DNA分子都

将以高分子