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(2025版)实体瘤常见驱动基因DNA和RNA高通量测序共检专家共识解读精准诊疗的基因检测新标准

目录第一章第二章第三章共识背景与意义DNA与RNA高通量测序方法常见驱动基因分析

目录第四章第五章第六章临床应用指南共识解读与实施未来展望与挑战

共识背景与意义1.

实体瘤驱动基因定义及重要性驱动基因是直接参与肿瘤发生、发展的关键分子，其变异可导致细胞增殖、凋亡逃逸等恶性表型，如EGFR、ALK、ROS1等基因的突变或融合在非小细胞肺癌中具有明确的靶向治疗价值。驱动基因的核心作用驱动基因检测是实体瘤精准分型的核心依据，通过识别特定变异可指导靶向药物选择，显著提升治疗有效率，例如NTRK融合泛实体瘤患者对TRK抑制剂的响应率可达75%以上。分子分型的基础肿瘤异质性和进化特性要求对驱动基因进行多时间点监测，DNA与RNA共检可全面捕捉治疗耐药后的新发变异（如MET扩增或EGFRT790M突变）。动态监测需求

技术标准化新增DNA/RNA同步提取、建库及生信分析的质量控制指标，规定融合基因检出下限需≤1%等关键参数，确保实验室间结果可比性。临床适应症扩展将共检推荐从非小细胞肺癌延伸至甲状腺癌、肉瘤等融合高发瘤种，并纳入METex14跳跃突变、NTRK融合等泛癌种靶点作为必检项目。报告解读规范化要求临床报告需明确标注RNA层面变异（如EML4-ALK融合转录本亚型）及其治疗关联性，避免信息遗漏。2025版更新核心要点

提升融合基因检出率DNA检测受内含子区域复杂结构限制，而RNA直接捕获成熟mRNA可规避内含子干扰，使ALK/RET等融合检出率提升30%-50%，尤其适用于小活检样本。共检可识别罕见融合伴侣（如KIF5B-RET）及非典型断裂位点，为泛癌种靶向治疗提供新机会，例如唾液腺分泌性癌中的ETV6-NTRK3融合。共检技术临床价值

优化剪接变异分析RNA测序可直接观测外显子跳跃事件（如METex14skipping），弥补DNA层面剪接位点预测的不确定性，使MET抑制剂适用人群扩大15%-20%。共检可发现新型剪接变异（如BRAF非V600E剪接变体），这些变异可能对现有靶向药物敏感，但传统DNA检测易漏诊。共检技术临床价值

指导免疫治疗决策RNA层面可同步分析PD-L1表达、肿瘤突变负荷（TMB）及微环境特征，结合DNA检测的MSI状态，为免疫检查点抑制剂疗效预测提供多维依据。特定融合基因（如NCOA4-RET）可能诱导免疫原性新抗原，共检有助于筛选免疫治疗潜在获益人群。共检技术临床价值

DNA与RNA高通量测序方法2.

要点三双链解旋与片段化通过物理或酶法将基因组DNA随机打断成200-500bp片段，经末端修复和接头连接后构建测序文库，适用于检测SNV/Indel/CNV等变异类型。要点一要点二杂交捕获技术使用特异性探针与目标区域DNA结合，通过磁珠分离富集目标序列，可覆盖常见驱动基因如EGFR/KRAS/TP53的全外显子区域，捕获效率需＞80%。扩增子测序策略针对特定热点区域设计多重PCR引物，通过靶向扩增实现高深度测序（通常＞1000×），适用于低频突变检测但易受扩增偏倚影响。要点三DNA测序基本原理

采用oligo-dT或随机引物反转录RNA，通过dUTP标记实现链特异性建库，可准确识别融合基因的断点位置和方向性。转录本捕获与链特异性建库通过检测跨越外显子边界的读段（splitreads）和异常配对读段（discordantreads），可发现ALK/ROS1/RET等融合事件，灵敏度达0.1%以上。外显子连接分析采用FPKM或TPM算法对基因表达水平进行归一化处理，需引入ERCCspike-in对照品校准技术变异，确保跨批次数据可比性。表达定量标准化利用TopHat2或STAR比对工具识别非连续比对信号，结合rMATS软件量化差异剪接事件，对METexon14跳跃突变等特殊变异具有诊断价值。可变剪接分析RNA测序关键技术

共检实验流程优化要求FFPE样本肿瘤细胞占比≥20%，RNA完整性数（RIN）≥5.0，DNA片段化程度≤30%，同步提取时需采用AllPrep等联合提取试剂盒。样本质量分级标准建立独立的DNA/RNA操作分区，使用带UV灭菌功能的PCR工作站，每批次设置阴性对照监测背景噪音，要求阴性对照检出变异数＜5个。交叉污染防控开发双通道生物信息学管道，DNA数据采用GATK标准流程，RNA数据通过STAR-Fusion分析，最终通过IntegrativeGenomicsViewer人工复核嵌合读段。数据整合分析流程

常见驱动基因分析3.

关键基因列表与变异类型EGFR基因家族：涵盖EGFR、HER2等受体酪氨酸激酶基因，主要检测点突变（如L858R、T790M）、插入/缺失突变（如exon