胶体金技术培训课件.pptxVIP

生化平台体金相关知识培训简介“农化残留分析与检测”企业新技术、新工艺、新产品课堂

胶体金技术概况与结合垫相关的工艺原理与膜相关的工艺原理010203与样品垫相关的工艺原理04主要内容实验的一些思考05

01胶体金技术概况1.胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径，也就是不同颜色的胶体金颗粒。其中分散的金颗粒直径一般在1-100nm之间，为负电荷分布。

01胶体金技术概况2.胶体金免疫层析法：将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。PVC底板吸水纸C线NC膜T线结合垫样品垫

02与膜相关的工艺原理1.硝酸纤维素膜又称为NC膜，硝酸纤维素膜（NC）是一种聚合物，在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。电镜下的NC膜

02与膜相关的工艺原理2.NC膜的种类与孔径选择（1）NC膜种类AE99、S140、M140、CN140、CN110、YNHS-120B/140B等；膜的宽度一般有18mm、20mm、25mm（2）膜的孔径选择层析膜的选择应依据不同的测试来决定。孔径越小（爬速越慢）灵敏度就越高。对于高亲和力的抗原抗体反应，使用较大的孔径（爬速较快）的层析膜可获得较快的测试速度同时也具有足够的灵敏度。孔径对侧向层析速度的影响标称孔径（um）层析4.5cm的时间（sec)32455185814012100（3）膜的爬速爬速是NC层析膜在免疫层析测试中最重要的参数，因为其直接影响测试反应的快慢

02与膜相关的工艺原理3.影响蛋白结合的因素：①蛋白缓冲液作用：提供合适的pH，改善亲水性，增溶性，提高稳定性（无通用蛋白缓冲液）②使用的膜根据需要自行选择，可进行不同型号膜试验比较③蛋白自身抗原或者抗体的纯度和浓度，制备和纯化方法等④应用体系膜的包被条件，包括膜的封闭、环境的湿度、T线和C线上抗原或抗体的浓度、划膜条件、晾膜温度、晾膜时间等，需要结合试验实际情况进行反复调整。4.反应动力学：流速增加，反应速率降低；流速增加，检测时间缩短；流速增加，灵敏度降低；流速增加，试剂用量增加；流速增加，背景降低；距离增加，流速降低；孔径增加，蛋白结合量减少

03与结合垫相关的工艺原理1.标记工艺：胶体金制备：柠檬酸三钠还原法基本规律：柠檬酸三钠用量多，胶体金颗粒直径小，反之用量越少，胶体金颗粒直径越大。（1）万分之四胶体金制备过程（以单位量1500ml，纳米颗粒约40nm为例）制备程序：①量取批量体积纯化水于锥形瓶中，加热至沸腾；②定量的1%氯化金溶液加入锥形瓶中，并继续加热至沸腾；③快速加入预热的2%柠檬酸三钠溶液，继续加热煮沸5min，溶液由蓝变紫再变暗红色；④停止加热，自然冷却至室温，定容至批量体积。组分名称单位量1%氯化金溶液60ml2%柠檬酸三钠溶液35ml胶体金颗粒1%氯化金溶液2%柠檬酸三钠溶液纳米颗粒（大约）颜色60:3060ml30ml50nm紫红色（偏紫）60:3560ml35ml40nm深红色60:4060ml40ml30nm深红色60:6060ml60ml20nm酒红色

03与结合垫相关的工艺原理胶体金制备：（2）胶体金烧制质量的鉴定①目测直观法：金胶溶液不浑浊、无漂浮物，无颗粒沉淀物，在日灯光下观察溶液中无微小颗粒②分光光度计光谱测定③透射电镜颗粒大小对胶体的影响

03与结合垫相关的工艺原理蛋白标记的原理：蛋白质在等电点或稍微偏碱的情况下，依靠静电引力或疏水力或共价键，被牢固地吸附于胶体金颗粒表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒表