寒地生花：CBF1基因赋能地被石竹抗寒新机制.docxVIP

寒地生花：CBF1基因赋能地被石竹抗寒新机制

一、引言：从生态需求到基因赋能的抗寒研究

（一）地被石竹的生态价值与低温胁迫挑战

地被石竹作为一种多年生常绿草本植物，在园林景观领域有着极为重要的应用价值。它植株丛生，茎呈匍匐状，叶片深绿且稍具白粉，伞状花序顶生，花色丰富，有深红、深粉、白及复色等。其成苗高度通常在10cm以下，花开时可达25cm左右，整体观感极佳。在庭院绿化中，地被石竹常被用于打造色彩斑斓的花境，与其他花卉搭配，层次分明，观赏性强；在公路绿化中，它能有效覆盖地面，防止水土流失，同时美化道路环境，为过往行人带来视觉享受，被广泛应用于花坛、护坡、高速公路分车带及大型绿地的布置，是不可多得的开花常绿地被植物，有着“草中之王，绿中之宝”的美誉。

尽管地被石竹本身具有一定的抗寒能力，能够在零下25℃的低温环境中生存，然而，在实际的生长环境中，尤其是北方地区，其常常面临更为严峻的低温考验。近年来，随着全球气候变化，极端寒潮天气愈发频繁，北方冬季的最低气温常常突破地被石竹的耐受极限。在这种情况下，地被石竹的越冬存活率明显下降，许多植株会因低温导致细胞内水分结冰，冰晶的形成破坏了细胞膜的结构，使得细胞无法正常进行物质交换和生理代谢，最终死亡。同时，低温还会影响地被石竹的返青过程，导致返青延迟，影响其在春季的正常生长和景观效果，这极大地限制了它在寒冷地带的广泛种植和应用。

（二）CBF1基因的抗寒调控机制

CBF1基因编码的蛋白质属于AP2/ERF家族转录因子，这个家族的转录因子在植物应对各种逆境胁迫中发挥着关键作用。CBF1的结构中包含一段保守的AP2结构域，该结构域使得CBF1能够特异性地识别并结合下游抗寒基因启动子区的DRE/CRT顺式作用元件。当植物感受到低温信号时，细胞内会发生一系列的信号转导过程，最终激活CBF1基因的表达。表达后的CBF1蛋白迅速进入细胞核，与抗寒基因启动子上的DRE/CRT元件结合，启动这些基因的转录和表达。

被CBF1激活的下游抗寒基因众多，其中脯氨酸合成酶基因的表达增加，使得植物体内脯氨酸含量上升。脯氨酸是一种重要的渗透调节物质，它能够调节细胞的渗透压，防止细胞在低温下失水，同时还能稳定细胞膜和蛋白质的结构，增强细胞的抗寒能力。超氧化物歧化酶（SOD）基因的表达也受到CBF1的调控，SOD是植物体内重要的抗氧化酶，能够清除低温胁迫下细胞内产生的过量活性氧，如超氧阴离子、过氧化氢等，避免活性氧对细胞造成氧化损伤，维持细胞内的氧化还原平衡，从而保证细胞的正常生理功能。大量的研究实例表明，将CBF1基因导入不同的植物中，都能显著提高植物在低温环境下的存活率。如在拟南芥中过量表达CBF1基因，转基因拟南芥在低温处理后的存活率相比野生型大幅提升，能够在更低温的环境下正常生长；在百脉根中转入CBF1基因后，转基因百脉根植株的脯氨酸含量明显增加，在4℃低温处理后，其生长状况明显优于对照植株，充分证明了CBF1基因在增强植物抗寒性方面的重要作用，也使其成为抗寒基因工程研究和应用中的核心靶点。

二、CBF1基因转化地被石竹的技术体系构建

（一）高效遗传转化体系的建立

1.材料准备与载体构建

为了将CBF1基因成功导入地被石竹，首先要选取合适的受体材料。地被石竹无菌苗叶片细胞具有较强的再生能力，在合适的培养条件下能够分化形成完整植株，因此被选为本次基因转化的理想受体。研究人员在无菌环境下，精心培育地被石竹无菌苗，待其生长至适宜阶段，小心取下叶片，将其切割成大小均匀的小块，为后续的转化实验做好准备。

在载体构建方面，pBI121是一种常用的植物表达载体，它具有广泛的宿主范围和稳定的遗传特性，能够在多种植物中发挥作用。为了构建pBI121-CBF1重组表达载体，研究人员运用了一系列精细的分子生物学技术。首先，从含有CBF1基因的质粒中通过限制性内切酶切割，精准地获取CBF1基因片段。CaMV35S启动子具有强大的启动活性，能够驱动外源基因在植物细胞中高效表达，研究人员将其与CBF1基因进行连接，确保CBF1基因能够在导入地被石竹细胞后正常表达。nptⅡ筛选标记基因则为后续筛选转化成功的细胞提供了便利，它能够使含有该基因的细胞在含有卡那霉素的培养基中正常生长，而未转化的细胞则无法生长。通过一系列的酶切、连接和转化等操作，成功构建出了pBI121-CBF1重组表达载体。随后，采用冻融法将重组表达载体转入农杆菌EHA105菌株中。在这个过程中，农杆菌EHA105细胞在低温下细胞膜的通透性增加，使得重组表达载体能够顺利进入细胞内，从而为后续将CBF1基因导入地被石竹细胞提供了稳定的载体系统