植物培养基组成与灭菌.pptxVIP

项目二培养基的组成、配制与灭菌

;温度

光照

湿度

气体

培养基的渗透压

pH值;培养基:是植物组织培养的重要材料，是外植体生长的营养物质，只有配制出适宜的培养基，才能使组织培养获得成功。

通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类成分，即水、矿质营养、有机成分（碳源）、植物生长调节剂、培养体的支持材料以及其他附加物等。

培养基的主要指标是营养成分及植物生长调节物质的浓度。

;（一）水;（二）矿质营养：

;国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）

在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。;根据植物体内含量多少，可把这些元素分为

※大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种

※微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下

有的只含0.1mg/kg

Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种

;1、大量元素

组织培养中，各种矿质营养主要从培养基中获得，N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无机盐提供。

不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求不同，需经试验确定。

目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。其中以MS应用最广泛。

以MS为例6中矿质元素分别由KNO3、NH4NO3、KH2PO4、MgSO4.7H2O、CaCl2.2H2O提供。;;Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；

S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。

Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。

大量元素中的氮通常采用硝态氮或铵态氮的形式被使用，但铵态氮浓度过高会对有些植物培养物造成伤害，不适宜使用过高的浓度。而常用MS培养基中既有硝态氮又有铵态氮。

;2、微量元素：;（三）有机成分：;;常用维生素;肌醇

;;天然复合物用量及用途;含糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类物质最重要。

糖类物质特点：用量：一般2-3%，胚培养4-15%。

◆具有热易变的性质

◆利于吸收和利用

◆为细胞呼吸代谢提供底物和能量。

◆调节渗透压

◆提供细胞合成新物质的碳骨架。

*糖浓度高低会影响形态建成程度。

;（四）植物生长调节物质;;1、生长素类：;2、细胞分裂素类：;3、赤霉素类：

;5培养材料的支持物;（六）其他成分：

1活性炭：使用量为0.2-1%。

◆吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质

◆抑制外植体褐变

◆防止玻璃苗的产生

◆促进培养物生长和

◆促进生根

缺点：

◆没有选择性

2抗生素

◆防止外植体内生菌造成的污染

常用青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5～20mg/L。;;◆培养基形态不同：固体培养基、液体培养基

◆培养过程不同：初代培养基、继代培养基

◆其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基

◆营养水平不同：基本培养基、完全培养基;;2、White培养基

◆1943年由White为培养番茄根尖而设计

◆1963年作了改良，提高MgSO4的浓度和增加硼元素

◆无机盐浓度较低

◆使用广泛

◆在生根培养、胚胎培养中有良好的效果;3、B5培养基

◆1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计

◆含有较低的铵盐

◆较高的硝酸盐和盐酸硫胺素;4、N6培养基

◆1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计

◆KNO3和（NH4）SO4含量高，不含钼;三培养基的选择;三培养基的选择;三培养基的选择;四培养基母液及激素母液的配制：;1、器皿和用具的准备

;;示例：MS培养基母液的配制：;;配制培养基应做好几点工作：

1、实验用具的准备。包括配制过程中所需电炉、酸度计、高压灭菌锅等设备及其他玻璃器皿的清洗和准备

2、试剂、药品的准备

3、根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配制的培养基体积计算所需各种母液及其他附加物的量;具体操作如下：

1、取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯或搪瓷锅内，加蒸馏水加热使之溶解，并不断搅拌；

2、根据计算所需量依