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第四节固定相固定相（stationaryphase）是HPLC的关键组成部分，它直接关系到柱效与分离度。1、液－固色谱固定相液-固吸附色谱固定相,多是具有吸附活性的吸附剂。常用有硅胶、氧化铝及高分子多孔微球等。2、化学键合相（1）优点（P526；5条，注意pH使用范围2~8）（2）分类非极性键合相：十八烷基键合相（ODS或C18）是最常用的非极性键合相。中等极性键合相极性键合相*第30页，共45页，星期日，2025年，2月5日第五节流动相（溶剂系统）对流动相的要求：与固定相不发生化学反应。对试样有适宜的溶解度。使k在1~10范围内（可用范围）或2~5（最佳范围），k小，tR小；k大，tR大，峰宽变大；与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑乙腈等可以降低柱压，提高柱效。*第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日（一）流动相对分离的影响（分离方程式）k受溶剂配比的影响n由色谱柱（固定相）性能决定α主要受溶剂种类的影响*第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日一、HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测，灵敏度差2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱）高压输送流动相柱效高（H↓，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测，灵敏度高第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日表20-1HPLC法与经典LC法性能对比经典LCHPLC固定相一般规格特殊规格固定相粒度(μm)75～5003～10粒度分布(RSD)20～30％＜5％柱长（cm）10～1003～25（分析型）柱内径（cm）2～50.3～0.46柱入口压强(MPa)0.001～0.12～40柱效（理论塔片数/m）10～1003×104～8×104样品用量(g)1～1010-6～10-4分析所需时间(h)1～200.05～0.5装置非仪器化仪器化*第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日二、HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、热稳定性差、离子型等样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日续前2．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性3
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