林木干旱胁迫转录因子 NAC 靶基因验证双荧光素酶报告系统试题库及答案.docVIP

林木干旱胁迫转录因子NAC靶基因验证双荧光素酶报告系统试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.双荧光素酶报告系统中，常用的萤火虫荧光素酶基因来自（）

A.植物B.昆虫C.细菌D.真菌

2.验证转录因子NAC与靶基因结合，首先要构建（）

A.表达载体B.克隆载体C.荧光素酶载体D.干扰载体

3.荧光素酶的作用是催化（）

A.底物发光B.基因表达C.蛋白合成D.核酸降解

4.在林木干旱胁迫研究中，NAC转录因子主要调控（）

A.光合作用B.水分代谢C.呼吸作用D.激素合成

5.双荧光素酶报告系统检测中，Renilla荧光素酶的作用是（）

A.作为内参B.增强信号C.检测靶基因D.标记转录因子

6.构建荧光素酶载体时，通常将靶基因的（）插入载体

A.启动子区域B.编码区C.终止子区域D.内含子区域

7.检测荧光素酶活性常用的仪器是（）

A.显微镜B.离心机C.酶标仪D.电泳仪

8.干旱胁迫下，NAC转录因子与靶基因启动子结合后，荧光素酶活性（）

A.降低B.升高C.不变D.不确定

9.进行双荧光素酶报告实验时，细胞转染的目的是（）

A.导入载体B.杀死细胞C.检测基因D.分离蛋白

10.以下哪种不是构建荧光素酶载体常用的工具酶（）

A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.反转录酶D.Taq酶

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.双荧光素酶报告系统的优点有（）

A.灵敏度高B.定量准确C.操作简单D.可同时检测多个基因

2.用于验证NAC靶基因的双荧光素酶报告系统实验材料包括（）

A.载体B.宿主细胞C.荧光素酶底物D.引物

3.在构建荧光素酶载体过程中需要注意（）

A.酶切位点B.读码框C.启动子方向D.终止子位置

4.干旱胁迫对林木的影响包括（）

A.生长受抑制B.气孔关闭C.渗透调节物质增加D.基因表达改变

5.检测荧光素酶活性时，可能影响结果的因素有（）

A.细胞密度B.转染效率C.底物浓度D.仪器误差

6.NAC转录因子在植物中的功能有（）

A.调控生长发育B.响应逆境胁迫C.参与激素信号转导D.促进光合作用

7.构建荧光素酶载体可选用的载体类型有（）

A.质粒载体B.病毒载体C.人工染色体载体D.噬菌体载体

8.双荧光素酶报告系统可用于研究（）

A.基因表达调控B.蛋白质相互作用C.转录因子与靶基因关系D.信号通路

9.实验中常用的宿主细胞有（）

A.大肠杆菌B.酵母细胞C.植物细胞D.动物细胞

10.验证NAC靶基因的实验流程包括（）

A.载体构建B.细胞转染C.荧光素酶活性检测D.数据分析

三、判断题（每题2分，共10题）

1.双荧光素酶报告系统只能用于植物基因研究。（）

2.NAC转录因子与靶基因启动子结合一定能增强荧光素酶活性。（）

3.构建荧光素酶载体时，引物设计不需要考虑酶切位点。（）

4.荧光素酶底物浓度对检测结果没有影响。（）

5.细胞转染效率不影响双荧光素酶报告系统实验结果。（）

6.干旱胁迫下，所有NAC转录因子表达量都会升高。（）

7.双荧光素酶报告系统可以直接检测转录因子与靶基因的结合。（）

8.实验中只需要检测萤火虫荧光素酶活性即可。（）

9.载体构建成功后可以直接用于细胞转染，不需要鉴定。（）

10.NAC转录因子在不同植物中功能完全相同。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述双荧光素酶报告系统的基本原理。

通过将靶基因启动子区域连接到萤火虫荧光素酶基因上游，同时转染表达Renilla荧光素酶的内参载体。转录因子与靶基因启动子结合影响萤火虫荧光素酶表达，通过检测两种荧光素酶活性比值来反映转录因子对靶基因的调控。

2.构建荧光素酶载体的主要步骤有哪些？

提取目的基因启动子区域，设计引物并扩增，用限制性内切酶对载体和目的片段酶切，再用DNA连接酶连接，转化大肠杆菌筛选阳性克隆并测序验证。

3.为什么在双荧光素酶报告实验中需要设置内参？

内参（Renilla荧光素酶）用于校正实验误差，如细胞转染效率、细胞活性差异