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细胞工程制药技术

干细胞技术

干细胞研究的历史

1896年，Wilson首次提出了干细胞的概念，用于描述寄生虫生殖系统的祖细胞。

人们认为干细胞只是能够产生子代细胞的一种比较原始的细胞

1917年，Pappenhein发现骨髓中造血干细胞的发生过程，首次提出成体干细胞的

概念

1969年，Thomas首次成功进行异体骨髓移植，并于1990年获得诺贝尔生理学或医

学奖

1981年，Evans和Kaufman从小鼠延迟着床的胚囊中分离获得小鼠的胚胎干细胞系；

同年，Gearhart等人从原始生殖细胞建立了胚胎生殖细胞系

随后，许多国家通过体外受精卵获得人胚胎干细胞系，并成功诱导分化成神经细胞、

造血细胞、肌肉细胞、胰岛细胞等

2006年，日本学者山中申弥将已分化的小鼠皮肤细胞，改造成具有类似于胚胎干

细胞分化潜能的诱导性多潜能干细胞。

干细胞

1.定义

干细胞（stemcell）是一类具有自我更新、分化潜能和增殖能力的细胞

自我更新：指细胞分裂后子代干细胞能保持与自己相同的基因型与表型，维持未分

化状态并具有相同的分化潜能。

分化潜能：干细胞分裂后转变为形态上、机能上、化学构成上与自己相异的子代细

胞。

增殖能力：细胞有丝分裂实现细胞数量的扩增。

干细胞的特点

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3.分类——分化潜能

全能干细胞（almightystemcell)：是具有无限分化潜能，可分化成一个完整个

体的干细胞。例如，胚胎干细胞。

亚全能干细胞（pluripotentstemcell）：失去了发育成完整个体的能力，但仍具

有形成内、中、外三个胚层来源的所有细胞型潜能的干细胞，或多潜能干细胞、万能干

细胞、三胚层多能干细胞等。

多能干细胞（multipotentstemcell）：是能够形成两种或两种以上类型细胞的干

细胞。例如神经干细胞、骨髓造血干细胞。

单能干细胞（monopotentstemcell)：是只能分化为单一类型细胞的干细胞。例

如表皮的基质细胞（即表皮干细胞）只能分化产生角化表皮细胞。

3.分类——来源分类

胚胎干细胞：通常是指由哺乳动物早期胚胎分离克隆出来的未分化细胞，能在体外

长期培养和增殖，具有稳定的二倍体核型，在适合的条件下可以分化为机体的各种组织

细胞，并具有嵌合体的能力

成体干细胞：指存在于已经分化组织中的未分化细胞，这类细胞能够自我更新并可

特化形成相应组织的细胞，其主要作用使维持机体功能稳定，替代有损伤和疾病导致的

衰老和死亡细胞等

诱导性多潜能干细胞：指由已分化的体细胞诱导而来，具有类似胚胎干细胞的高度

自我更新能力和多向分化潜能的干细胞。iPS细胞的获得表明细胞分化是可逆的。

4.干细胞的分离纯化常用技术

利用细胞体积和密度进行分离纯化：选择具有一定密度和黏度的分离介质

选择性细胞凝集：羟乙基淀粉和甲基纤维素可以使红细胞聚集，更快的从造血干细

胞中沉降出来

基于不同黏度特性的细胞分离方法：利用细胞黏附能力的强弱及黏附的速度分离或

消除某些类型的细胞

利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法：免疫溶解法、流式细胞分选、平面黏附分

离法（淘选技术）、免疫磁珠分选

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5.干细胞的诱导分化

化学试剂诱导法、细胞因子诱导法、基因调控法

（一）胚胎干细胞

胚胎干细胞（EmbryoStem，ES)是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外

分化抑制培养分离的一种全能性细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。因此是

一种全能干细胞。

ES细胞的特征

ES细胞的形态结构与早期胚胎细胞相似，细胞体积小、核大、核质比例高，核仁

明显

ES细胞有高度的分化潜能，具有在一定条件下向三个胚层细胞分化能力

将ES细胞注入到同源动物或免疫缺陷动物皮下，形成畸胎瘤

形成类胚体：在无