林木低温胁迫抗冻蛋白 AFP 基因启动子克隆试题库及答案.docVIP

林木低温胁迫抗冻蛋白AFP基因启动子克隆试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.克隆AFP基因启动子常用的技术是（）

A.PCRB.电泳C.离心D.层析

2.构建文库时，首先要提取（）

A.蛋白质B.DNAC.多糖D.脂质

3.启动子克隆中筛选阳性克隆常用（）

A.抗生素B.荧光标记C.酶切D.测序

4.用于扩增AFP基因启动子的引物设计依据是（）

A.随机序列B.已知序列C.蛋白质结构D.细胞类型

5.低温胁迫下AFP基因启动子活性（）

A.不变B.增强C.减弱D.消失

6.提取DNA时常用的试剂是（）

A.乙醇B.丙酮C.甲醛D.乙醛

7.转化感受态细胞常用（）

A.热激法B.超声法C.光照法D.磁处理

8.以下可用于验证启动子功能的是（）

A.荧光定量PCRB.蛋白电泳C.细胞培养D.组织切片

9.构建载体时需要用到的工具酶是（）

A.淀粉酶B.限制酶C.脂肪酶D.脲酶

10.从文库中筛选目的克隆的方法是（）

A.直接挑选B.核酸杂交C.细胞融合D.抗体筛选

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.克隆AFP基因启动子的方法有（）

A.基因组步移法B.反向PCR法C.构建文库筛选法D.荧光定量法

2.构建文库所需的材料有（）

A.载体B.宿主细胞C.引物D.连接酶

3.引物设计的原则包括（）

A.长度合适B.GC含量合理C.避免二聚体D.特异性强

4.影响DNA提取质量的因素有（）

A.材料新鲜度B.提取方法C.试剂纯度D.操作时间

5.筛选阳性克隆的方法有（）

A.蓝白斑筛选B.抗性筛选C.测序验证D.酶切鉴定

6.用于启动子功能验证的技术有（）

A.报告基因法B.凝胶阻滞实验C.基因敲除D.表达谱分析

7.克隆载体的特点有（）

A.有复制原点B.有筛选标记C.多克隆位点D.可整合到基因组

8.转化感受态细胞的方法有（）

A.化学转化法B.电穿孔法C.病毒感染法D.热激法

9.验证克隆成功的方法有（）

A.测序B.酶切电泳C.荧光定量D.蛋白质检测

10.低温胁迫对林木的影响包括（）

A.细胞膜损伤B.酶活性改变C.基因表达变化D.生长受抑制

三、判断题（每题2分，共10题）

1.克隆AFP基因启动子只能用一种方法。（）

2.构建文库不需要考虑载体的类型。（）

3.引物长度越长越好。（）

4.DNA提取过程中可以随意操作。（）

5.蓝白斑筛选能准确判断克隆是否成功。（）

6.报告基因法可直接验证启动子功能。（）

7.感受态细胞制备后可长期保存。（）

8.克隆载体的复制原点可有可无。（）

9.测序结果与预期不符一定是克隆失败。（）

10.低温胁迫下AFP基因表达量不变。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述克隆AFP基因启动子的主要步骤。

答：提取基因组DNA，设计引物，通过PCR等技术扩增启动子片段，将片段连接到载体，转化感受态细胞，筛选阳性克隆，测序验证。

2.引物设计时为何要考虑GC含量？

答：合适的GC含量能保证引物与模板稳定结合，GC含量过高或过低都可能影响引物与模板的退火温度及扩增效果。

3.简述蓝白斑筛选的原理。

答：载体含LacZ基因部分序列，重组后LacZ基因失活。在含X-gal和IPTG的平板上，未重组菌产生β-半乳糖苷酶使X-gal变蓝，重组菌菌落为白色。

4.如何验证克隆的AFP基因启动子具有活性？

答：可将启动子与报告基因连接构建表达载体，转化细胞，检测报告基因表达情况，若有表达则证明启动子有活性。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.比较不同克隆AFP基因启动子方法的优缺点。

答：基因组步移法能获取已知序列旁侧启动子序列，但操作复杂；反向PCR法简单但引物设计要求高；构建文库筛选法全面但工作量大。各有优劣，需依实际情况选择。

2.讨论低温胁迫下AFP基因启动子克隆对林木抗冻研究的意义。

答：克隆该启动子有助于深入了解林木