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解码红脂大小蠹：嗅觉相关基因表达谱与OBPs功能探秘

一、引言

1.1研究背景与目的

红脂大小蠹（Dendroctonusvalens），又名强大小蠹，属鞘翅目小蠹科，是一种极具破坏力的森林害虫。其原产于北美，原本主要危害北美扭叶松、美国黄松。然而，随着国际贸易往来以及全球气候变化，红脂大小蠹于1998年在我国山西被首次发现危害健康油松，此后其危害范围不断扩大，对我国的林业经济发展造成了严重影响。

在我国，红脂大小蠹主要攻击油松、樟子松、白皮松、华山松、华北落叶松和白杆等松科植物。与在原产地不同，它不仅危害树势衰弱的树木，对健康树木也发起攻击，导致大量寄主树木死亡。据相关资料显示，在1999年底，该虫在河北、河南、山西的发生面积达52.6万公顷，其中严重危害面积13万公顷，个别地区油松死亡率高达30%，致使600多万株松树枯死。在山西，2000年调查统计其危害面积达16.3万公顷，成灾面积9.1万公顷，已有342.4万株成材油松受害枯死。其危害主要集中在树干基部和根部，通过蛀食韧皮部，破坏树木的疏导组织，从而导致树木死亡。同时，红脂大小蠹在入侵过程中还携带伴生有害真菌，这些真菌与小蠹虫协同危害，进一步加剧了对松树的破坏。

昆虫的嗅觉系统在其生存和繁衍中起着关键作用，红脂大小蠹也不例外。它依靠嗅觉系统识别寄主植物挥发物、信息素等化学信号，以实现寻找寄主、交配、繁殖等行为。在昆虫嗅觉机制中，气味结合蛋白（OBPs）是重要的组成部分。OBPs是一类分泌性蛋白，溶解于嗅觉感受器淋巴液中，能够运输气味分子到达嗅觉神经元表面的嗅觉受体，是昆虫专一性识别外界气味物质的第一步生化反应。深入研究红脂大小蠹的嗅觉相关基因表达谱及其OBPs功能，有助于揭示其嗅觉识别的分子机制，为开发新型有效的生物防治技术提供理论基础，对于防控红脂大小蠹的危害具有重要的现实意义。

本研究旨在通过对红脂大小蠹嗅觉相关基因表达谱的分析，以及OBPs功能的深入探究，明确红脂大小蠹识别寄主植物和信息素的分子基础，为开发基于嗅觉机制的红脂大小蠹绿色防控技术提供科学依据和理论支持。

1.2国内外研究现状

国内外对红脂大小蠹的研究主要集中在生物学特性、生态学特性、防治技术等方面。在生物学特性方面，明确了其在我国的生活史，如在林州市多为1年1-2代，虫期不整齐，一年中除越冬期外，林内均有成虫活动，高峰期出现在5月中、下旬。在生态学特性研究中，分析了其分布与扩散规律，以及对不同寄主植物的选择偏好。在防治技术上，目前主要包括生物防治、化学防治和物理防治等。生物防治方面，利用其天敌如大唼蜡虫、大红蚂蚁等进行防控；化学防治采用药剂熏蒸、注射或树干喷药等方法；物理防治则有诱捕器诱杀、清理枯死木等措施。

在昆虫嗅觉基因和OBPs的研究领域，已经取得了一些重要成果。众多研究表明，昆虫的嗅觉受体（ORs）、离子otropic受体（IRs）等基因家族在气味识别中发挥关键作用。对OBPs的研究发现，其具有多种类型，如性信息素结合蛋白（PBPs）、普通气味结合蛋白（GOBP1和GOBP2）等，不同类型的OBPs在昆虫嗅觉识别中具有不同的功能。在果蝇中，已经鉴定出多个OBP基因，并且对其功能进行了初步研究。在家蚕中，通过X-射线衍射和NMR等技术确定了PBP的三维结构，揭示了其与气味分子结合的机制。

然而，针对红脂大小蠹嗅觉相关基因表达谱及其OBPs功能的研究仍相对较少。虽然已有研究表明红脂大小蠹能够识别寄主植物挥发物和信息素，但具体的嗅觉相关基因及OBPs在这一过程中的作用机制尚不明确。不同地理种群的红脂大小蠹在嗅觉基因表达和OBPs功能上是否存在差异，也有待进一步探究。此外，目前对于红脂大小蠹嗅觉机制的研究，缺乏从基因表达谱到蛋白功能的系统性分析，这限制了基于嗅觉机制的防控技术的开发和应用。

1.3研究方法和技术路线

本研究采用以下实验方法：利用转录组测序技术分析红脂大小蠹不同发育阶段和不同组织（触角、非触角组织等）的嗅觉相关基因表达谱，筛选出差异表达的嗅觉相关基因；通过RACE技术克隆红脂大小蠹OBP基因的全长序列；采用原核表达技术表达并纯化OBP蛋白；运用荧光竞争结合实验、等温滴定量热法等方法研究OBP蛋白与气味分子的结合特性；利用RNA干扰技术研究OBP基因功能缺失对红脂大小蠹嗅觉行为和生理功能的影响。

技术路线如下：首先采集不同发育阶段和不同组织的红脂大小蠹样本，提取总RNA并进行转录组测序，分析测序数据得到嗅觉相关基因表达谱。根据表达谱结果筛选出差异显著的OBP基因，设计引物通过RACE技术克隆其全长。构建原核表达载体，转