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分子生物学（杨洋）第六章RNA剪接（RNASplicing）

章节导言：RNA剪接的生物学意义

真核生物基因转录生成的前体mRNA（pre-mRNA）包含非编码的内含子（Intron）与编码的外显子（Exon），RNA剪接即通过精准切除内含子、连接外显子，形成成熟mRNA的过程。这一过程是“断裂基因”表达的关键环节，具有三大核心价值：

遗传信息优化：通过选择性剪接产生多种蛋白质异构体，实现“一个基因，多个蛋白”的高效表达；

进化适应性：内含子的存在便于基因重组，加速新基因进化；

疾病关联：约15%的人类疾病由剪接异常导致（如脊髓性肌萎缩症），是分子医学研究的核心靶点。

第一节RNA剪接的结构基础

1.1前体mRNA的剪接信号

pre-mRNA的内含子两端存在高度保守的核苷酸序列，为剪接体识别提供关键信号，真核生物通用保守序列如下：

位置

保守序列（人类）

功能

5剪接位点（供体位点）

GU（内含子起始）

剪接体U1snRNP结合位点

分支点（BranchPoint）

A（内含子内部，距3端约20-50nt）

形成套索结构的关键核苷酸

3剪接位点（受体位点）

AG（内含子终止）

剪接体U2AF结合位点

注：酵母等低等真核生物保守性更高（如5端为GU，3端为AG，分支点A周围序列高度固定），高等生物保守性略有降低，但核心GU-AG规则仍适用（少数内含子遵循AU-AC规则，称为“次要剪接途径”）。

1.2剪接体的组成与装配

剪接体（Spliceosome）是执行RNA剪接的巨型核糖核蛋白复合物（约3.5MDa），由5种小核RNA（snRNA：U1、U2、U4、U5、U6）与约300种蛋白质组成，其装配过程呈“分步有序”特征：

起始复合物（E复合体）形成：U1snRNP结合5剪接位点，U2AF（U2辅助因子）结合3剪接位点与分支点；

A复合体形成：U2snRNP取代U2AF，结合分支点A（需ATP供能），此时pre-mRNA与U1、U2形成“早期复合物”；

B复合体形成：U4/U6?U5tri-snRNP（三snRNP复合物）加入，U4与U6碱基配对，U5结合外显子序列；

活性剪接体（C复合体）形成：U4脱离，U6与U2、U1重新配对（U6取代U1结合5剪接位点），构象重排后激活催化活性。

第二节主要RNA剪接机制

2.1核pre-mRNA剪接（主要途径：GU-AG型）

该途径依赖剪接体催化，分为两步转酯反应（TransesterificationReaction），全程无能量消耗（ATP仅用于剪接体装配与构象变化）：

第一步转酯反应：

分支点A的2-OH攻击5剪接位点的磷酸二酯键，断裂内含子5端与外显子1的连接，形成“外显子1-3-OH”与“内含子套索结构”（LariatStructure，内含子5端与分支点A通过2,5-磷酸二酯键连接）；

第二步转酯反应：

外显子1的3-OH攻击3剪接位点的磷酸二酯键，断裂内含子3端与外显子2的连接，同时连接外显子1与外显子2，释放套索状内含子（后续被核酸酶降解）。

图解提示：用箭头标注电子转移方向，区分“套索结构形成”与“外显子连接”两个关键步骤，突出2,5-磷酸二酯键的特殊性。

2.2自剪接内含子（Self-SplicingIntrons）

部分原核生物、线粒体与叶绿体的内含子可自主完成剪接，无需剪接体参与，根据结构与机制分为两类：

类型

代表来源

关键特征

催化依赖

I型内含子

四膜虫rRNA、真菌线粒体

含引导序列（GuideSequence），需GTP/GMP作为辅因子

自身RNA的催化活性（核酶）

II型内含子

植物线粒体、细菌tRNA

形成类似剪接体的二级结构，分支点A启动反应

自身RNA的催化活性，反应机制与pre-mRNA剪接相似（套索结构）

2.3tRNA剪接（特殊途径）

真核生物tRNA前体的内含子多位于反密码子环附近，剪接过程需核酸酶与连接酶协同作用，分为三步：

剪切反应：内切核酸酶（如酵母的RNaseP与RNaseZ）在内含子两端切割，产生含5-OH的外显子与含2,3-环磷酸的内含子；

末端修饰：磷酸酶去除外显子5端磷酸，环磷酸二酯酶打开内含子的环磷酸；

连接反应：RNA连接酶以ATP为能量，连接外显子两端，形成成熟tRNA。

第三节RNA剪接的调控：选择性剪接

3.1选择性剪接的定义与类型

选择性剪接（Alterna