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实验三非特异性反应、细胞免疫测定
1.吞噬作用 示教
2.溶菌酶实验 1个平板/组
3.机体细胞免疫功能测定
E玫瑰花环实验 示教
淋巴母细胞转化实验 示教
4.免疫细胞的分离与纯化——小鼠脾细胞或胸腺细胞的制备1份/组;一、非特异性免疫功能的测定
（一）、天然免疫的组成;参与天然免疫的效应分子
防御素
补体系统
细胞因子
溶菌酶
其他效应分子;参与天然免疫的效应细胞
吞噬细胞
NK细胞
??T细胞
肥大细胞
NKT细胞
上皮细胞及其附属成分;1、吞噬细胞及吞噬作用;中性粒细胞单核-吞噬细胞
名称小吞噬细胞大吞噬细胞
部位外周血中外周血:单核
不同组织中:吞噬细胞
大小直径10～12μm直径为14～17μm
胞核呈杆状或分叶状,常为2-5叶肾形或弯曲折叠的不规则形
核质核染色质呈块状,着色深颗粒纤细而疏松，故着色较浅
胞浆富含中性颗粒胞浆较丰富的溶酶体
寿命短,更新快长
特点应答迅速,在早期起主要作用持续1-2天,是天然免疫晚期应答的主要
效应细胞
吞噬范围主要是化脓性细菌细菌、病毒、原虫、其他异物
;吞噬发生的最初1-2小时，吞噬细胞
趋化因子
聚集于微生物附近
粘附于微生物表面
吞入胞浆，形成吞噬体
一系列反应，杀灭微生物;实验方法：中性粒细胞的吞噬作用;中性粒细胞吞噬葡萄球菌;实验方法：巨噬细胞的吞噬作用;巨噬细胞吞噬鸡红细胞;3、溶菌酶试验;实验室准备：
（1）带菌平板的准备：处理好溶壁微
球菌加入琼脂内,到平板,冷凝备用。
（2）每平板打4个小孔，如图。;同学们操作步骤：;;二、E玫瑰花环形成实验;现在是17页\一共有38页\编辑于星期四;现在是18页\一共有38页\编辑于星期四;三、T淋巴细胞转化实验;转化细胞形态特征;现在是21页\一共有38页\编辑于星期四;现在是22页\一共有38页\编辑于星期四;四、小鼠脾细胞的制备;1.固定小鼠;2.暴露眼球;3.小镊子夹眼球放血，拉颈椎处死小鼠;4.剪开皮肤，暴露腹腔，找到脾脏;5.分离，摘除脾脏;6-1.冲洗脾脏;6-2.冲洗脾脏;7-1.用注射器芯研磨脾脏，获得细胞悬液;7-2.用注射器芯研磨脾脏，获得细胞悬液;8.低速离心（2000转/分钟，10min）;9-1.离心后弃上清，留沉淀的细胞;9-2.离心后弃上清，留沉淀的细胞;9-3.离心后弃上清，留沉淀的细胞;10-1加入红细胞裂解液1ml，吹打混匀，室温静置2分钟，加入RPMI-1640液终止反应。
10-2低速离心（2000转/min，10min），弃上清。
10-2将沉淀细胞重悬于2ml培养液中，进行细胞形态观察和计数。;谢谢大家！
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