（79页PPT）DNA的生物合成.pptVIP

聚合酶基本性质相同复制过程基本相同半保留复制、半不连续复制、双向复制原核、真核生物DNA复制的异同相同点真核生物多复制起点全部复制后才可开始下一次复制酶和蛋白因子不同末端需端粒和端粒酶原核生物1个复制起；起点可连续发生复制酶和蛋白因子不同逆转录和其他复制方式ReverseTranscriptionOtherDNAReplicationWays第四节某些病毒的遗传物质是RNA。少数低等生物如M13噬菌体，它的感染型只含单链DNA。原核生物的质粒，真核生物的线粒体DNA，都是染色体外存在的DNA。这些非染色体基因组，采用特殊的方式进行复制。一、逆转录病毒的基因组的复制逆转录病毒的基因组是RNA，其复制方式是逆转录RNA模板逆转录酶DNA-RNA杂化双链RNA酶单链DNADNA聚合酶双链DNARNA病毒在细胞内复制成双链DNA的前病毒(provirus)。在某些情况下，前病毒基因组通过基因重组整合到细胞基因组内，并随宿主基因一起复制和表达。DNA-polⅡDNA-polII基因发生突变，细菌依然能存活。DNA-polⅡ对模板的特异性不高，即使在已发生损伤的DNA模板上，它也能催化核苷酸聚合。因此认为，它参与DNA损伤的应急状态修复。DNA-polⅢ是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。（二）常见的真核细胞DNA聚合酶三、复制保真性的酶学依据遵守严格的碱基配对规律；聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能；复制出错时DNA-pol的即时校读功能。DNA复制的保真性至少要依赖三种机制：（一）核酸外切酶活性核酸外切酶(exonuclease)是指能从核酸链的末端把核苷酸依次水解出来的酶，外切酶是有方向性的。核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活性掺入正确配对的底物。B：碱基配对正确，DNA-pol不表现活性。（二）碱基的正确选择DNA聚合酶协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。四、复制中DNA解链伴有分子拓扑学变化DNA分子的碱基埋在双螺旋，只有把DNA解成单链，它才能起模板作用。（一）多种酶参与DNA解链和稳定单链状态解螺旋酶(helicase)：利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链。引物酶(primase)：复制起始时催化生成RNA引物的酶。单链DNA结合蛋白(singlestrandedDNAbindingprotein,SSB)：在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整。E.Coli基因图谱（二）DNA拓扑异构酶理顺DNA链复制过程中正超螺旋的形成，需拓扑异构酶水解并连接磷酸二酯键。拓扑异构酶分类：拓扑异构酶Ⅰ切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。反应不需ATP。拓扑异构酶Ⅱ切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛。利用ATP供能，连接断端，DNA分子进入负超螺旋状态。拓扑酶的作用方式：五、DNA连接酶连接单链缺口连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。DNA连接酶(DNAligase)作用方式：HO5’3’3’5’DNA连接酶ATPADP5’3’5’3’在复制中起最后接合缺口的作用。在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。也是基因工程的重要工具酶之一。DNA连接酶功能：提供核糖3?-OH提供5?-P结果DNA聚合酶引物或延长中的新链游离dNTP去PPi(dNTP)n+1连接酶复制中不连续的两条单链不连续→连续链拓扑酶切断、整理后的两链改变拓扑状态DNA聚合酶，拓扑酶和连接酶催化3?,5?-磷酸二酯键生成的比较DNA生物合成过程TheProcessofDNAReplication第三节（一）复制起始：DNA解链形成引发体需要解决两个问题：1.DNA解开成单链，提供模板。2.形成引发体，合成引物，提供3?-OH末端。一、原核生物的DNA生物合成DnaADnaB、DnaCDNA拓扑异构酶引物酶SSB3?5?3?5?引发体和引物含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA复制起始区域的复合结构称为引发体。引