第二章酶与细胞的固定化.ppt

2.葡萄糖异构酶世界上生产规模最大，应用最为成功的一种固定化酶。第61页，共98页，星期日，2025年，2月5日二、固定化酶在医学上的应用1.消血栓纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应，无法长期使用。酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。第62页，共98页，星期日，2025年，2月5日2.人工肾原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。第63页，共98页，星期日，2025年，2月5日第64页，共98页，星期日，2025年，2月5日酶传感器固定化酶和电化学传感器的结合。优点：①既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度；②酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定。三、在分析检测中的应用第65页，共98页，星期日，2025年，2月5日SensitiveandspecificRapidSimpleBiosensor第66页，共98页，星期日，2025年，2月5日1967年Updike等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器——葡萄糖氧化酶电极。第67页，共98页，星期日，2025年，2月5日葡萄糖酶电极酶电极示意图?－D－葡萄糖＋O2 D－葡萄糖酸－1，5－内酯＋H2O2半透膜酶胶层感应电极第68页，共98页，星期日，2025年，2月5日GlucoseGluconicacidGlucoseoxidaseOxygenHydrogenperoxideMembraneElectrode根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。第69页，共98页，星期日，2025年，2月5日将聚合物单体和酶溶液混合后，再用聚合促进剂(包括交联剂)的作用而聚合，酶就包埋在载体中达到固定化。酶本身不参与反应，所以较安全。但在聚合过程中有自由基产生及聚合时放出热，酶与试剂间可能发生化学反应，这些因素可能会使酶失效，或者降低酶活性。操作时注意条件的控制。第29页，共98页，星期日，2025年，2月5日1、网格型常用的包埋剂如：聚丙烯酰胺凝胶。先把酶与丙烯酰胺单体分散于疏水介质,再进行聚合。 如：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶包埋于丙烯酰胺和丙烯酸中，然后再用羰二亚胺活化载体上的羧基而共价偶联固定。第30页，共98页，星期日，2025年，2月5日优点:1.包埋容量10-100毫克蛋白/克单体。 2.改变单体与交联剂比例,控制凝胶孔径的分布,改善酶的持留与底物和产物扩散转移状况。3.改变单体性质,可调整固定化酶的亲水和亲脂特性。第31页，共98页，星期日，2025年，2月5日2、微囊型 常用的微囊型包埋剂有尼龙膜、火棉胶、醋酸纤维素等。 主要是用几十到几百微米、厚度有250的半透膜将酶包埋固定化。半透膜容许小分子底物和产物自由出入囊的内外，囊的表面积相对体积的比值大，底物和产物的交换进行迅速。第32页，共98页，星期日，2025年，2月5日制备方法：(1)界面沉淀法利用某些高聚物在水相和有机相的界面上溶解度极低而形成皮膜将酶包埋。A.酶溶液在水不互溶的有机相中乳化B.加入一种不溶解高聚物的有机溶剂C.高聚物在油-水界面上沉淀、析出、形成膜,将酶包埋,D.从有机相移入水相第33页，共98页，星期日，2025年，2月5日例：硝酸纤维素固定化酶酶水溶液+硝酸纤维素?乳化分散加苯甲酸丁酯??纤维素在酶周围凝聚加Tween20（乳化剂）由有机相移入水相得到火棉胶微囊。优点：1）纤维表面积和重量比值高2)凝聚后酶稳定性好