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宠物微生物
宠物临床常见的真菌性疾病检测技术
主讲人：徐亚亚
一、显微镜检查
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%乙醇处理。
（一）采集标本
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
（二）检查方法
一、显微镜检查
最简单而重要的诊断方法。
一、显微镜检查
直接镜检
方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后，轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。
用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
菌丝
用于检测隐球菌及其它有荚膜的孢子。
一、显微镜检查
涂片镜检
方法：取一小滴墨汁与标本混合，盖上盖玻片后直接镜检。
孢子
染色可更好地显示真菌形态和结构；
革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等；
瑞氏染色（美蓝-伊红Y染料）适用于组织胞浆菌；
PAS(PeriodicAcid-Schiffstain)染色(糖原染色)常用于组织切片。
一、显微镜检查
染色
一、显微镜检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。
一、显微镜检查
培养
方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基(Sabouraudagar/沙氏琼脂)上，置室温或37℃培养1～3周。
必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。
瑞氏染色-组织胞浆菌
简单快速：
操作简单，只需要检验人员有基本的显微镜操作知识即可完成；检测时间短，只需极端时间即可完成检验。
适用范围广：
传统方法只能检测某些特定的真菌，而不能对所有的真菌进行检测，而该荧光染料能够与各类真菌结合而发出荧光，包含念珠菌，组织细胞浆菌，曲霉菌等。此外，该款试剂盒还能检测出卡氏肺孢子虫囊肿，寄生物（例如疟原虫），以及各类地域性变异真菌菌丝。角蛋白，胶原蛋白，弹性纤维也能使用本试剂盒进行检测，可将这些物质的结构边界进行荧光标记从而能够明显区分并检出。
二、荧光染色
（一）真菌荧光染色优势
灵敏性高：
通过荧光素于真菌细胞壁中几丁质等多糖结合，反应灵敏，与传统的直接镜检法相比，阳性率高，只因降低真菌检测露。
辨识度高：
在显微镜下以清晰的荧光表现，图像清楚。辨识度高，易于观察，减少检测者的主观判断带来的误差。
二、荧光染色
（二）荧光染色法原理
荧光染色法是一种利用重组几丁质酶来检测宠物各种标本中是否存在真菌有形成分的方法。真菌荧光染色液中，经过特殊荧光素标联的重组几丁质酶可以高亲和力与真菌细胞壁上的几丁质结合并发出荧光，在荧光显微镜下可以清楚的观察到真菌形态。
二、荧光染色
（三）荧光染色法使用范围
二、荧光染色
（四）荧光染色法操作步骤
三、伍德氏灯检查
伍氏灯（wood’slight）检查，又称滤过性紫外线检查，是真菌检查首选的检验方法。伍氏灯放出的紫外线通过含氧化镍的玻璃，在暗室照射病变区、脱毛或皮屑。
三、伍德氏灯检查
操作方法：
将伍德氏灯在暗室内开启，光源与皮肤距离5～10cm左右，光线对准宠物皮肤患处，观察有无荧光出现，患处呈现各色荧光者为阳性（+），无荧光者为阴性（-）。
犬小孢子菌感染的毛发可发出苹果绿色荧光，而石膏样小孢子菌和须毛癣菌感染的毛发无荧光或荧光颜色不同。
(一)
(二)
三、伍德氏灯检查
感谢各位聆听
主讲人：徐亚亚
宠物临床常见的真菌性疾病检测技术
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