聚合酶链式反应 (3).pptVIP

聚合酶链式反应第1页，共15页，星期日，2025年，2月5日Aftertheexperimentisfinished,studentsshouldbeabletoexplaintheprincipleofPolymeraseChainReaction(PCR)andknowhowtorunaPCRexperiment.一、实验目的(ExperimentalPurpose)通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。第2页，共15页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理(ExperimentalPrinciple)PCRwasinventedbyKaryMullisandhiscolleaguesinthe1980s,andisarelativelysimpletechniquebywhichaDNAorcDNAtemplateisamplifiedmanythousandormillionfoldquicklyandreliably.PCR技术是KaryMullis和他的同事于20世纪80年代发明的。该技术相对较为简单，它可以快速可靠地将DNA或cDNA模板扩增数千倍甚至上百万倍。第3页，共15页，星期日，2025年，2月5日Thepolymerasechainreaction(PCR)isusedtoamplifyasequenceofDNAusingapairofoligonucleotideprimerseachcomplementarytooneendoftheDNAtargetsequence.Theseareextendedtowardseachotherbya

thermostableDNApolymeraseinareactioncycleofthreesteps:denaturation,primerannealingandpolymerization.

聚合酶链式反应(PCR)用于利用一对寡核苷酸引物扩增一段DNA序列，其中每条引物分别与靶序列的两端互补。这对引物通过三步循环反应在热稳定的TaqDNA聚合酶的作用下各朝着对应的方向延伸，每步循环反应包括以下三个步骤：模板变性，引物退火和引物延伸。第4页，共15页，星期日，2025年，2月5日Asfigureexplains,thistechniqueusesenzyme(DNApolymerase)tomakeacopyofadefinedregionofDNA.第5页，共15页，星期日，2025年，2月5日Firstahightemperature(about95℃)isneededtoseparatetheDNAstrands;首先，高温(约95℃)使DNA双链解离。Secondarelativelylowtemperature(about55℃)isneededtoallowtheprimerstoannealtothetemplateDNAstrands;其次，在相对较低的温度(约55℃)下使引物与模板DNA链退火。Thirdamediumtemper-ature(about72℃)isneededtoallowDNAsynthesis.然后，在适中的温度(约72℃)下使DNA合成。Eachcycletakesaslittleasafewminutes,anditusuallyrakesfewerthan30cyclestoproduceasmuchamplifiedDNAasnecessary.第6页，共15页，星期日，2025年，2月5日ThePCRcycle:(1)Thereactioncyclecomprisesa95°CsteptodenaturetheduplexDNA(2)anannealingstepofaround55°Ctoallowtheprimerstobind(3)a72°Cpolymerizationstep.Mg2+anddNTPsarerequiredinaddit