示差吸光光度法设.PPTVIP

*选择原则：“吸收最大，干扰最小”灵敏度选择性*（2）吸光度范围的选择从仪器测量误差的角度来看，为使测量结果得到较高的准确度，一般应控制标准溶液和被测试液的吸光度在0.2~0.8范围内。可通过控制溶液的浓度或选择不同厚度的吸收池来达到目的。*（3）参比溶液的选择利用参比溶液来调节仪器的零点，可消除由吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差，扣除干扰的影响。*参比溶液选择：A）试液及显色剂均无色，蒸馏水作参比溶液。B）显色剂为无色，被测试液中存在其他有色离子，用不加显色剂的被测试液作参比溶液。C）显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。*D）显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。E）改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，以此溶液作为参比溶液消除干扰。*2标准曲线的制作光吸收定律:吸光度与吸光物质的含量成正比，光度法进行定量的基础，标准曲线制作根据。方法:在选择的实验条件下分别测量一系列不同含量的标准溶液的吸光度，以标准溶液中待测组分的含量为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，称为标准曲线，此时测量待测溶液的吸光度，在标准曲线上可以查到与之相对应的被测物质的含量。*理论基础：朗伯-比尔定律相同条件下测定不同浓度标准溶液的吸光度AA～c作图**有时标准曲线不通过原点。可能是由于参比溶液选择不当，吸收池厚度不等，吸收池位置不妥，吸收池透光面不清洁等原因所引起的。若有色配合物的解离度较大，特别是当溶液中还有其他配位剂时，使被测物质在低浓度时显色不完全。找出原因，加以避免。*依据Beer定律，A与C关系应为经过原点的直线3对朗伯-比尔定律的偏离*在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到通过原点向浓度轴弯曲的现象(吸光度轴弯曲)。这种情况称为偏离朗伯-比尔定律。若在曲线弯曲部分进行定量，将会引起较大的误差。*偏离朗伯－比尔定律的原因主要是仪器或溶液的实际条件与朗伯-比尔定律所要求的理想条件不一致。*（1）非单色光引起的偏离*朗伯-比尔定律只适用于单色光，但由于单色器色散能力的限制和出口狭缝需要保持一定的宽度，所以目前各种分光光度计得到的入射光实际上都是具有某一波段的复合光。由于物质对不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗伯－比尔定律的偏离。**克服非单色光引起的偏离的措施◎使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的“单色光”，使标准曲线有较宽的线性范围。◎入射光波长选择在被测物质的最大吸收处，保证测定有较高的灵敏度，此处的吸收曲线较为平坦，在此最大吸收波长附近各波长的光的ε值大体相等，由于非单色光引起的偏离要比在其他波长处小得多。◎测定时应选择适当的浓度范围，使吸光度读数在标准曲线的线性范围内。*（2）介质不均匀引起的偏离朗伯－比尔定律要求吸光物质的溶液是均匀的。如果被测溶液不均匀，是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光通过溶液后，除一部分被试液吸收外，还有一部分因散射现象而损失，使透射比减少，因而实测吸光度增加，便标准曲线偏离直线向吸光度轴弯曲。故在光度法中应避免溶液产生胶体或混浊。*※目视比色法的原理：设照射光的强度为I0，透过标准溶液和试液后的光强度分别为I标和I试，当溶液颜色深度相同时：I标＝I试，即：ε1b1C1＝ε2b2C2由于ε1＝ε2；且液层厚度相等，b1＝b2所以：C1＝C2。*※标准系列法的优点是：(1)仪器简单，操作简便，适宜于大批试样分析。(2)测定的灵敏度高，适宜稀溶液中微量物质的测定。(3)某些显色反应不符合朗伯-比耳定律时，仍可用目视比色法进行测定。主要缺点是准确度较差，相对误差约为5-20％。不同人看，结果不同。常用于限界分析。*二、分光光度计的类型chopper*1．单光束分光光度计特点：使用时来回拉动吸收池→移动误差对光源要求高比色池配对*2．双光束分光光度计特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差对光源要求不高可以自动扫描吸收光谱*3．双波长分光光度计特点：利用吸光度差值定量消除