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人Tau蛋白截短片断过表达转基因果蝇模型的构建与特征解析

一、引言

1.1研究背景

阿尔茨海默病（Alzheimersdisease，AD）作为一种神经退行性疾病，严重威胁着全球老年人的健康和生活质量。据统计，全球范围内AD患者数量持续攀升，给社会和家庭带来了沉重的负担。其主要病理特征包括神经细胞内的神经元纤维缠结（NFTs）、神经细胞外的淀粉样斑块（又称老年斑，SP）以及大量神经细胞的凋亡、丧失等。其中，NFTs的主要组成成份便是Tau蛋白，Tau蛋白在AD的发病机制中扮演着重要角色，然而其具体的作用机制目前仍不清楚。

Tau蛋白是一种主要的细胞骨架蛋白，在正常生理状态下，它能够与微管结合，维持微管的稳定性和正常功能，对神经细胞的形态和轴突运输起着关键作用。但在AD患者体内，Tau蛋白会发生异常变化，其中C末端缺失的Tau已经证实是神经纤维缠结的组份之一。大量体内体外实验表明，Tau蛋白可以是多种蛋白酶的水解底物，在阿尔茨海默氏症病人的脑脊液中，就存在着Tau蛋白的截短片段，体外实验也证明Tau蛋白的水解产物参与到细胞的凋亡过程中。这些截短片段的产生可能是由于体内蛋白酶的异常激活，导致Tau蛋白被过度水解。

尽管目前对Tau蛋白在AD中的作用有了一定认识，但Tau蛋白水解产生的截短片段在AD中的具体作用仍然是一个未解之谜。研究这些截短片段的作用机制，对于深入理解AD的发病机制具有重要意义。它们可能直接参与了神经纤维缠结的形成，或者通过影响细胞内的信号传导通路，间接导致神经细胞的损伤和死亡。因此，建立合适的模型来研究Tau蛋白截短片段的毒性机制，成为了该领域的研究热点之一。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过将Tau蛋白截短成不同的截短片段，利用显微注射的方法构建Tau基因截短片段的转基因果蝇，并利用果蝇中的UAS/GAL4系统驱动截短的Tau蛋白片段在果蝇的眼睛中异位表达，从而建立人Tau蛋白截短片断过表达转基因果蝇模型，并对其进行鉴定。

该模型的建立对于阿尔茨海默病的研究具有多方面的重要意义。从基础研究角度来看，果蝇作为一种经典的模式生物，具有生命周期短、繁殖力强、遗传操作简便等优点，能够为研究Tau蛋白截短片段的毒性机制提供一个高效的在体研究平台。通过观察转基因果蝇在表达Tau蛋白截短片段后的生理、行为和病理变化，可以深入了解这些截短片段如何影响神经细胞的功能，进而揭示它们在AD发病过程中的作用机制。这有助于我们从分子和细胞层面深入理解AD的发病机理，为后续的研究提供重要的理论基础。

在药物研发方面，该转基因果蝇模型为筛选和评价潜在的抗AD药物提供了有力工具。可以利用该模型对各种化合物进行高通量筛选，快速评估它们对Tau蛋白截短片段毒性的抑制作用，以及对AD相关病理特征的改善效果。这能够加速抗AD药物的研发进程，提高研发效率，为AD患者带来更多的治疗希望。通过对药物作用机制的研究，还可以为药物的优化和改进提供方向，推动AD治疗领域的发展。建立人Tau蛋白截短片断过表达转基因果蝇模型对于阿尔茨海默病的研究和治疗具有不可替代的重要价值，有望为解决这一全球性的健康问题做出贡献。

二、人Tau蛋白截短片断相关理论

2.1Tau蛋白概述

Tau蛋白作为一种主要存在于神经细胞中的微管结合蛋白，在神经系统中扮演着至关重要的角色。它由位于人类第17号染色体上的MAPT基因编码，该基因全长超过100kb，包含16个外显子，通过选择性剪接可产生多种异构体，在中枢神经系统中，外显子2、3和10选择性剪接产生6种Tau异构体：0N3R、1N3R、2N3R、0N4R、1N4R和2N4RTau。这些异构体在结构和功能上存在一定差异，但都具备微管结合的能力。

从结构上看，Tau蛋白包含多个重要功能区域。N端的外伸结构域约占其总长度的2/3，参与与其他细胞骨架蛋白的相互作用，并从微管表面外伸出来，与其他细胞骨架成分和细胞膜接触，对维持轴突的稳定起着关键作用。C端的微管结合域则是Tau蛋白的主要功能区域，包含与微管蛋白结合的重复性多肽片段和氨基酸残基构成的羧基末端区域，其中重复性多肽片段主要有4条，分别简称为R1、R2、R3和R4，负责稳定作为细胞骨架的微管结构，调节神经细胞轴突运输能力和突触的可塑性。此外，Tau蛋白上还存在84个潜在的磷酸化位点，其磷酸化状态在多种激酶的作用下处于动态平衡，对Tau蛋白的功能具有重要调控作用。

在神经系统中，Tau蛋白的正常作用不可或缺。它能够与微管蛋白结合，促进微管的聚合形成微管，并与形成