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生物技术有限公司实习心得

生物技术有限公司实习心得

实习单位与岗位介绍

我实习的单位是国内知名的XX生物技术有限公司，该公司成立于2010年，专注于生物制药、基因治疗和细胞治疗领域的研发与生产。公司拥有超过2000名员工，研发团队占比达35%，年研发投入超过营业收入的20%。我所在的部门是研发中心的分子生物学实验室，担任实验助理实习生，主要负责协助研究员进行基因克隆、蛋白表达和纯化等相关实验工作。

实习内容与工作成果

1.基因克隆与载体构建

实习期间，我参与了公司创新药物研发项目中的基因克隆工作。在导师的指导下，我完成了5个目标基因的克隆工作，包括：

-引物设计与优化：使用PrimerPremier5.0软件设计了12对引物，通过调整引物长度、GC含量和退火温度，优化了PCR反应条件。最终引物扩增效率达到92%，比初期提高了15%。

-PCR扩增与产物纯化：完成了约200次PCR反应，平均每次反应体积为50μl，成功获得目标基因片段约15kb。采用DNA凝胶回收试剂盒进行产物纯化，纯化后DNA浓度平均为85ng/μl，纯度(A260/A280)在1.8-2.0之间。

-TA克隆与测序验证：将纯化后的PCR产物连接至pMD19-T载体，转化至DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆送测序。测序结果显示，5个基因的克隆准确率达到100%，无突变发生。

2.蛋白表达与纯化

在蛋白表达与纯化方面，我参与了重组蛋白的表达优化工作：

-表达载体构建：将目标基因亚克隆至pET-28a(+)表达载体，构建了6个重组表达质粒，通过双酶切和测序验证构建正确性。

-蛋白表达条件优化：测试了不同诱导条件（IPTG浓度0.1-1.0mM，诱导温度16-37℃，诱导时间2-16h）对蛋白表达量的影响。通过SDS分析，确定最佳诱导条件为0.5mMIPTG，25℃诱导12h，蛋白表达量达到菌体总蛋白的35%。

-蛋白纯化：采用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白，纯化后蛋白纯度达到95%以上，收率约为65%。通过BCA法测定蛋白浓度，平均每升培养液可获得约25mg目标蛋白。

3.实验室日常管理与质量控制

除了参与具体实验项目，我还负责了以下实验室管理工作：

-试剂管理：维护实验室试剂库存，定期检查试剂有效期，整理并更新试剂清单。实习期间共整理试剂300余种，淘汰过期试剂25种，节约实验成本约8000元。

-仪器维护：负责实验室常用仪器（如PCR仪、离心机、分光光度计等）的日常维护和校准，确保仪器正常运行。共完成仪器维护记录45份，发现并解决仪器故障3起。

-实验数据管理：建立实验电子数据库，规范记录实验数据，确保数据可追溯性。实习期间共录入实验数据1200余条，数据完整性和准确性达到99.5%。

实习中遇到的问题与解决方法

1.PCR扩增效率低下

在实习初期，我负责的PCR实验经常出现扩增效率低的问题，目标基因片段扩增成功率仅为60%左右。通过查阅文献和向导师请教，我采取了以下解决措施：

-优化引物设计，调整引物长度和GC含量，避免形成二级结构

-优化PCR反应体系，调整Mg2?浓度和dNTP比例

-优化PCR程序，采用梯度PCR确定最佳退火温度

经过两周的优化，PCR扩增成功率提高至92%，满足了后续实验需求。

2.蛋白表达量不足

在重组蛋白表达实验中，初期蛋白表达量较低，仅达到菌体总蛋白的15%。通过系统分析，我发现可能存在以下问题：

-表达载体中的启动子活性不足

-目标基因密码子使用频率与宿主菌不匹配

-培养条件（如温度、诱导时机）不适宜

针对这些问题，我采取了以下措施：

-更换为T7强启动子载体

-对目标基因进行密码子优化

-优化培养条件，采用低温诱导和分阶段诱导策略

经过优化，蛋白表达量提高至35%，满足了后续功能研究的需求。

3.实验数据不一致

在实验过程中，我发现同一实验重复3次后，数据存在较大差异，相对标准差(RSD)达到15%。通过分析，我发现了以下问题：

-实验操作不规范，存在人为误差

-实验条件控制不严格，如温度、时间等参数波动

-数据记录不完整，缺乏标准化记录模板

针对这些问题，我采取了以下改进措施：

-制定标准操作规程(SOP)，规范实验步骤

-使用电子计时器和温度计等设备，精确控制实验条件

-设计标准化的实验记录