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2025年(生物制药)生物制药工程试题及答案

一、单项选择题（每题1分，共20分）

1.在CHO细胞中实现人源化单克隆抗体高表达时，最常用的启动子是

A.CMV即刻早期启动子

B.SV40早期启动子

C.EF1α启动子

D.CAG杂合启动子

答案：D

解析：CAG杂合启动子由CMV早期增强子、鸡β-actin启动子及兔β-globin内含子拼接而成，兼具强转录活性与长期稳定性，已被多家药企用于CHO悬浮培养体系，表达量普遍高于单独使用CMV或EF1α。

2.2025版《中国药典》对重组蛋白HCP残留限度要求为

A.≤10ppm

B.≤50ppm

C.≤100ppm

D.≤200ppm

答案：C

解析：2025版通则0531明确规定，除非另有临床风险评估，终产品HCP残留应≤100ppm，且需采用ELISA与LC-MS双平台交叉验证。

3.下列哪种层析模式最适合捕获pI=7.2、分子量150kDa的Fc融合蛋白

A.阳离子交换（CEX）pH5.0

B.阴离子交换（AEX）pH8.0

C.疏水层析（HIC）1.5M(NH?)?SO?

D.羟基磷灰石（CHT）pH6.8

答案：A

解析：该蛋白pI高于工作pH，带正电荷，CEX可高效结合；同时CEX对150kDa大分子传质阻力小，捕获阶段回收率可达95%以上。

4.用于检测慢病毒复制competentlentivirus(RCL)的指示细胞系为

A.HeLa

B.293T

C.C8166-SEAP

D.Vero

答案：C

解析：C8166-SEAP细胞基因组整合有SEAP报告基因，一旦RCL存在，SEAP分泌量与RCL滴度呈线性，灵敏度可达1IU/mL，优于传统p24ELISA。

5.在2000L一次性生物反应器中，采用微泡分布器时，最可能引起细胞死亡的物理参数是

A.叶轮尖端速度2.5m/s

B.气体表观线速0.1m/s

C.能量耗散率10?W/m3

D.气泡直径1mm

答案：C

解析：高能量耗散率导致湍流涡旋尺寸接近细胞直径，直接撕裂细胞膜；CHO细胞耐受极限约5×10?W/m3，超过后活率24h内下降30%。

6.下列哪种修饰可延长蛋白在体内的半衰期且不影响活性

A.PEG20kDa随机共价结合

B.引入FcRn结合增强突变（YTE）

C.高甘露糖型N-糖基化

D.羧基端加组氨酸标签

答案：B

解析：YTE突变（M252Y/S254T/T256E）提高Fc与FcRn在pH6.0亲和力约10倍，循环半衰期延长3-4倍，且不影响FcγR结合及ADCC。

7.关于CRISPR-Cas9敲除GS（谷氨酰胺合成酶）基因以提高CHO细胞产率，下列说法错误的是

A.需同时敲除GS的2个等位基因

B.可用MSX筛选获得敲除克隆

C.敲除后细胞需补充谷氨酰胺

D.敲除本身可直接提高比生产率

答案：D

解析：GS敲除仅解除MSX抑制，使外源GS-载体获得扩增优势，比生产率提高源于基因扩增而非敲除本身直接效应。

8.2025年FDA发布的《人工智能驱动的过程控制指南》中，对AI模型再验证周期建议为

A.每批次

B.每月

C.每6个月

D.当数据漂移±10%时

答案：D

解析：指南强调基于风险的数据漂移监测，当输入特征分布偏移超过±10%，需触发离线再验证，而非固定周期。

9.在双特异性抗体构建中，防止轻链错配的最佳策略是

A.CrossMab

B.KiH（Knobs-into-Holes）

C.共同轻链

D.静电转向

答案：C

解析：共同轻链消除错配根源，纯度可达99.5%，优于CrossMab或KiH仍需后续纯化去除副产物。

10.用于高浓度蛋白制剂（150mg/mL）粘度降低的辅料组合是

A.精氨酸+脯氨酸

B.蔗糖+吐温80

C.甘露醇+聚山梨酯20

D.氯化钠+EDTA

答案：A

解析：精氨酸破坏蛋白-蛋白静电吸引，脯氨酸扰乱疏水簇，两者协同可将粘度从30cP降至8cP以下，且不影响长期稳定性。

11.下列哪种病毒清除验证模型病毒属于非包膜、小型、抗性强

A.MuLV

B.SV40

C.MVM

D.PRV

答案：C

解析：MVM（小鼠微小病毒）直径18-26nm，无包膜，对热和低pH抵抗力强，是验证细小病毒清除的“worst-case”模型。

12.在下游纯