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常用植物基因转化方法特点比较转化方法农杆菌法PEG法电击法微针注射法基因枪法花粉管通道法受体材料完整细胞原生质体原生质体原生质体完整细胞卵细胞宿主范围有无无无无有性繁殖植物组培条件简单复杂复杂复杂简单无嵌合体比例有无无无多无操作复杂性简单简单复杂复杂复杂简单设备要求便宜便宜昂贵昂贵昂贵便宜工作效率高低低低高低单子叶植物应用少可行可行可行广泛广泛（三）受体系统

1.原生质体受体系统:嵌合体少，易变异，再生频率低原生质体恢复细胞壁具有分化再生能力，是应用最早的再生受体系统之一。优点：高效、广泛地摄取外源DNA或遗传物质，获得基因型一致的克隆细胞，所获转基因植株嵌合体少，适用于多种转化系统；缺点：不易制备、再生困难和变异程度高。2.愈伤组织受体系统：植体材料经过脱分化培养诱导形成愈伤组织，转化（带有目的基因质粒的农杆菌侵染），分化培养获得再生植株。愈伤组织易接受外源DNA，转化效率高,适用性广，变异大优点：外植体来源广，繁殖快，易接受外源基因，转化效率高。缺点：遗传稳定性差、嵌合体。因此需要连续的再生系统3.种质系统：生殖细胞接受外源DNA能力强，转化的基因无显隐性的影响,与育种结合紧密，受季节限制以生殖细胞如花粉粒、卵细胞等受体细胞进行外源基因转化的系统。一是利用组织培养技术进行小孢子和卵细胞的单倍体培养、转化受体系统；二是直接利用花粉和卵细胞受精过程进行基因转化，如花粉管导入法，花粉粒浸泡法，子房微针注射法等。4.毛状根诱导和培养一些次生代谢产物只有在根里生长发根农杆菌感染双子夜植物，RI质粒诱导产生毛状根。形态方面：Ri质粒诱导快速生长的、非定向性、高分支的毛状根的形成代谢方面：Ri质粒转化根能合成与原植物相同或相似的次生代谢物，并且发根合成次生代谢物具有遗传稳定性。毛状根生长快速和次级代谢产物含量高，特别适用于从木本植物和难于培养的植物中得到较高含量的次级代谢产物。毛状根具有如下特点：激素自养，不必加外源激素；次级代谢产物含量高且稳定；增殖速度快。用发根农杆菌经直接注射法，外植体接种感染，原生质体共培养法诱导毛状根发根农杆菌转化后，经筛选鉴定低盐浓度下生长，培养植物细胞培养工业化存在的问题生长缓慢,通常完成一次生产周期需4-5周次级代谢物含量低培养细胞不稳定等多数产物积累于胞内不耐受剪切力一般的说，只有当次级代谢产物的价格高于1000美元/kg时，才考虑采用植物细胞培养方法。第三节转基因植物一、转基因植物的产生和发展（一）转基因植物的基本概念转基因植物：遗传修饰体(geneticallymodifiedorganisms,GMOs)近年发展迅速应用广泛世界第一例转基因植物-烟草1983年在美国问世。1986年,首批转基因植物-抗虫和抗除草剂棉花进入田间试验。1992年中国成为世界上第一个转基因植物商品化种植的国家，开创了转基因植物商品化应用的先河；当时种植的是一种抗黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒双价转基因烟草。（二）转基因植物的几大类型1.抗除草剂:除草作用的酶和蛋白质基因;以除草剂为底物的酶的基因转移2.抗虫:从细菌中、植物组织中和动物体内分离出相关抗性基因,转入植物中3.抗病4.抗逆境:抗旱、抗寒、抗热和抗盐5.品质改良6.代谢修饰7.生产药物二、转基因植物技术原理和方法（一）基因获得（1）氨基酸序列反推核酸序列，合成探针，从基因组或cDNA文库中筛选利用这种方法人类首次人工合成了胰岛素基因。虽然在早期采用这种方式已经成功地克隆了许多基因。局限性：兼并密码子;效率低;未知基因及产物分离蛋白质明确氨基酸序列推导核苷酸序列人工合成（2）分离蛋白，制备抗体，用抗体从cDNA表达文库中筛选（3）根据数据库信息，利用保守区域制备PCR引物，进行扩增（4）以其他物种的类似基因为探针，杂交分离相应基因（二）外源基因导入1.载体转化系统是目前植物基因工程中使用最多、机理最清楚、技术最成熟的、最重要的一种转化系统TumorinducedbyA.tumefaciens冠瘿瘤过程：先将带有目的基因的质粒整合到农杆菌基因组中，再将此农杆菌与植物细胞共同培养36～48h，转化植物细胞，然后分离洗涤去菌后通过组织培养获得转基因植物或形成冠瘿瘤和发状根等组织，这些组织也就是一种天然的选择标记。(1)根癌农杆菌转化系统。含有Ti质粒，感染双子叶植物时，质粒中DNA整合到植物的染色体上，并随染色体一起复制。随后T-DNA携带的基因在植物