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生物化学第十章生化分离技术与应用-习题试卷及答案

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、选择题（每小题2分，共20分。请将正确选项的字母填在题干后的括号内）

1.下列哪种层析技术主要依据分子大小进行分离？

A.离子交换层析

B.亲和层析

C.凝胶过滤层析

D.吸附层析

2.在蛋白质电泳中，SDS主要利用了SDS的哪种特性？

A.强碱性

B.带负电荷并掩盖蛋白质电荷

C.能与蛋白质形成氢键

D.吸附在硅胶表面

3.下列哪种方法不属于基于“相似相溶”原理的分离技术？

A.萃取

B.透析

C.离子交换层析

D.薄层层析

4.从含多种蛋白质的粗提液中获得纯化蛋白，通常首先采用哪种层析方法？

A.亲和层析

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.吸附层析

5.下列关于凝胶过滤层析的描述，错误的是？

A.分子较小的物质扩散进入凝胶孔内，路径较长，洗脱速度慢

B.分子较大的物质不能进入凝胶孔内，路径短，洗脱速度快

C.该技术可用于蛋白质的浓缩

D.该技术主要用于按分子量大小分离蛋白质

6.离子交换层析中，若要使带负电荷的蛋白质被吸附到阳离子交换树脂上，则树脂应带何种电荷？

A.正电荷

B.负电荷

C.中性

D.可带正电或负电，取决于pH

7.下列哪种技术最适合分离同工酶？

A.离子交换层析

B.亲和层析

C.等电聚焦电泳

D.凝胶过滤层析

8.超滤属于哪种类型的分离技术？

A.电泳技术

B.膜分离技术

C.层析技术

D.萃取技术

9.在蛋白质纯化过程中，目标蛋白的回收率通常指？

A.纯化后目标蛋白占总蛋白的百分比

B.纯化后目标蛋白占总输入蛋白的百分比

C.纯化后目标蛋白占总结合蛋白的百分比

D.纯化后目标蛋白在溶液中的浓度

10.亲和层析的核心在于利用了什么特异性相互作用？

A.分子大小差异

B.电荷相互作用

C.共价键结合

D.生物特异性识别

二、填空题（每空2分，共20分。请将答案填在横线上）

1.分子排阻层析（凝胶过滤层析）是利用______大小不同来分离蛋白质等大分子物质的技术。

2.离子交换层析中，固定相是______，流动相是______。

3.蛋白质在电场中泳动的主要驱动力是______。

4.选择层析介质时，应考虑目标物质的______、______以及分离目的等因素。

5.透析是利用______将小分子物质从溶液中分离出来的技术。

三、简答题（每题5分，共15分）

1.简述离子交换层析的原理及其洗脱的基本方法。

2.与其他层析技术相比，亲和层析有何独特之处？

3.简述蛋白质电泳的基本原理，并列举两种常见的蛋白质电泳技术名称。

四、论述题（10分）

某研究需要从含多种酶的细胞提取物中分离纯化一种特定的脱氢酶。请根据脱氢酶的性质（如分子量、等电点、可能存在的特定结合位点等），设计一个包含至少两种不同层析技术的分离纯化策略，并简述每步操作的原理和目的。

试卷答案

一、选择题

1.C

2.B

3.B

4.B

5.C

6.A

7.C

8.B

9.B

10.D

二、填空题

1.分子

2.固定离子交换树脂；流动相缓冲液

3.电荷

4.等电点；分子量（或大小）

5.半透膜

三、简答题

1.原理：利用固定相（离子交换树脂）上带有的可解离基团，在特定pH条件下带有一定净电荷，与溶液中带相反电荷的蛋白质发生离子交换而实现分离。

洗脱方法：

*改变pH：将pH调至蛋白质等电点附近，降低蛋白质与树脂的结合力，或改变树脂上固定离子的解离状态，使蛋白质解离。

*改变离子强度：加入高浓度与树脂上电荷类型相同的盐（竞争离子），利用离子竞争效应置换出结合的蛋白质。

2.独特之处：利用蛋白质或酶分子与其特定配体（如抗体、激素、金属离子等）之间的高度特异性生物亲和力进行分离。选择性极高，纯化倍数大，是获得高纯度目标物质的有效方法。

3.原理：在电场作用下，带电荷的蛋白质分子向与其电荷相反的电极移动。蛋白质的迁移速度取决于其净电荷量、电荷密度、分子大小以及介质阻力等因素。

常见技术名称：醋酸纤维素膜电泳、琼脂糖凝胶电