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WWW.WATSONWYATT.COM第二章分光光度法第1页，共29页，星期日，2025年，2月5日第一节分光光度法概述1、电磁辐射光是电磁辐射。电磁辐射具有粒子的性质，也具有波动的性质，其波动性可用波长（?）来表示。所谓波长即指在波传播路线上具有相同振动位相的相邻两点之间的距离。电磁辐射的粒子性的主要特征是每个光子具有能量?，其与波长之间的关系为：?＝ｈ?ｃ/λ。第2页，共29页，星期日，2025年，2月5日电磁辐射按波长顺序排列，称为电磁波谱波谱区名称波长范围频率范围(MHZ)跃进能级类型?射线0.005～0.14nm6×1014～2×1012核能级X射线0.0001～10nm3×1014～3×1010内层电子能级远紫外光10～200nm3×1010～1.5×109内层电子能级近紫外光200～400nm1.5×109～7.5×108原子及分子的阶电子或成键电子能级可见光400～750nm7.5×108～4.0×108原子及分子的阶电子或成键电子能级近红外光0.75～2.5?m4.0×108～1.2×108分子振动能级中红外光2.5～50?m1.2×108～6.0×106分子振动能级远红外光50～1000?m6.0×106～3×105分子转动能级微波0.1～100cm3×105～3×102分子转动能级射频1～1000m3×102～0.3电子自旋/核自旋第3页，共29页，星期日，2025年，2月5日?2、吸收光谱电磁辐射是物质内部运动变化的客观反应，任一波长的光子能量?与物质内能（原子的、分子的或原子核的）的变化?E相对应，即?E＝?＝ｈ?ｃ/λ第4页，共29页，星期日，2025年，2月5日?3、比色法和吸光光度法?利用比较溶液颜色深浅的方法来确定溶液中有色物质的含量，这种方法就称为比色分析法。用眼睛观察比较溶液颜色深浅来确定物质含量的分析方法称为目视比色法。利用光电效应测量通过有色溶液后透过光的强度，求得被测物质含量的方法称为光电比色法。?分光光度法是以棱镜或光栅为分光器，并用狭缝分出很窄的一条波长的光，并同样测量透过光的强度来求得被测物质的含量；由于光的波长范围窄，其测定的灵敏度，选择性和准确度都比比色法高。第5页，共29页，星期日，2025年，2月5日第二节朗伯－比尔定律及其影响因素?1、朗伯－比尔定律实验发现透过光强度与有色溶液中吸收物质的分子数量c以及透过溶液的厚度L有关。其数学表达式如下：-logⅠt/Ⅰo=kcL其中k为比例系数，其数值只取决于吸光物质的特性，而与吸收层厚度及浓度无关。式中又称为吸光度A，上式又可写为A＝kcL；上式称为朗伯－比尔定律，是紫外－可见吸收法定量分析的基础。第6页，共29页，星期日，2025年，2月5日?2、吸光系数和摩尔吸光系数在-logⅠt/Ⅰo=kcL中，如果有色物质溶液的浓度c用g／L表示，吸收厚度以cm表示，比例常数k称为吸光系数。如果浓度c用mol／L表示，吸收厚度以cm表示，则比例常数k称为摩尔吸光系数。摩尔吸光系数的单位为l／(mol.cm)。它表示物质的浓度为1摩尔／升，液层厚度为1cm时溶液的吸光度。符号常用ε表示，因此朗伯－比尔定律又可写成：A＝εcL第7页，共29页，星期日，2025年，2月5日员工队伍规划现有员工队的描述未来的员工队伍预测差距分析?3、吸光度可加性原理某一波长的入射光通过几个相同厚度的不同溶液，其总的吸光度为各溶液吸光度之和。同样如果溶液中含有不同的吸光物质，只要各组分间没有相互作用，溶液的总吸光度为各组分吸光度之和。这就是吸光度可加性原理。吸光度可加性原理是十分有用的，例如进行光度分析时，试剂或溶剂有吸收，则可从所测总吸光度中直接进行扣除，这就是以试剂或溶剂做空白的依据。第8页，共29页，星期日，2025年，2月5日主要信息来源?4、影响朗伯－比尔定律正确性的因素?入射光非单色光严格讲朗伯—比尔定律只适用于单色光。但目前各种方法所得到的入射光，实际上是一定波长范围内的光，因而产生了对朗伯－比尔定律的偏离。?溶液中的化学反应溶液中的吸光物质常因离解、缔合、形成新的化合物或互变异构体等的化学变化而改变了浓度，因而导致对朗伯－比尔