遗传性疾病的试验诊断.pptVIP

单基因遗传病的基因诊断单基因遗传病中常见的分子异常遗传性疾病的产生是由于一个（或数个）基因发生异常导致这些基因所载有的遗传信息受到改变，而发病是通过遗传物质的表达产物——蛋白质（或酶）的表现异常所致。基因突变主要包括点突变、片段性突变和动态性突变。点突变(pointmutation)包括错义突变、无义突变、移码突变各种点突变所造成的后果：蛋白质分子量改变蛋白质合成量下降无蛋白质合成片段性突变(fragememtalmutation)核苷酸的丢失和增多缺失：基因中硷基（遗传物质）的丢失插入：外来基因片段插入某一基因序列中倍增：基因内部某一段序列发生重复基因重排：基因组中原来不在一起的基因由于某些原因重新排列动态性突变(dynamicmutation)以三核苷酸为单位的重复序列在传递过程中不稳定，会发生扩展，即子代的重复次数往往较亲代大为增加，因此又称动态性突变。脆性X综合征：CGG重复少年脊髓型共济失调：GAA重复亨廷顿病：CAG重复X染色体（xq27.3）的脆性位点脆性X综合征是遗传性智力缺陷最常见的一种。致病基因FMR-1的5’端有CGG三核苷酸重复区。普通男性群体中的患病率为1/4000。普通女性群体中的患病率为1/6000。患者智力低下、语言障碍、行为异常、呈特殊面容。正常个体：CGG重复次数6~52次，中国人群以(CGG)28为多见。前突变(premutation)：(CGG)53~230为携带者，虽表型正常，但在传递过程中易发生进一步扩展，使后代的CGG重复次数大大增加，并有异常表型。全突变：(CGG)≥230时，100%的男性表现为典型的脆性X综合征,53%的女性表现为程度不同的智力低下。遗传性疾病基因诊断的策略（一）直接诊断策略 基因诊断的直接策略是通过各种分子生物学技术检测基因的遗传缺陷，因此直接诊断的前提是被检测基因的正常序列和结构必须被阐明。直接诊断由于是直接揭示遗传缺陷，因而比较可靠。直接诊断常用技术Southern印迹技术将基因组DNA用限制性内切酶水解，经凝胶电泳分离用碱处理使凝胶中的DNA变性为单链，转移至硝酸纤维素膜或尼龙膜上用标记的特异性探针与变性单链杂交，可使特异条带显影实验结果为限制性长度片段多态性分析（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）直接诊断常用技术聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）在突变点二侧设计引物，经扩增后可得含有突变点的扩增产物以突变筛查技术找出突变点SSCP、DGGEMeltingcurveanalysisDNAsequencingDMD的基因检测Duchennemusculardystrophy(DMD)是一种高发病率、高致残、高致死的X连锁的遗传性疾病，平均每3500个活产男婴中即有一个患者DMD基因的全长为250kb，有79个外显子DMD的最主要遗传缺陷是外显子缺失，约占突变的60%~70%用多重PCR技术对外显子进行筛查DMD基因外显子的检测（二）间接诊断策略间接诊断是在家系中进行连锁分析，通过分析可确定个体来自双亲的同源染色体中的哪一条为致病染色体（与致病基因连锁），从而判断该个体是否带有致病基因间接诊断不是寻找DNA的遗传缺陷，而是通过分析DNA的遗传标志的多态性估计被检者患病的可能性遗传标志及其多态性单拷贝序列在基因组中仅出现一次或少数几次，大多数基因(50%~80%)在单倍体中都为单拷贝重复序列真核生物染色体DNA中存在许多不同程度的重复序列，按照孟德尔遗传定律传递大多存在于基因的非编码区根据DNA序列重复出现频率的不同而分为不同类型中度重复序列短分散片段(shortinterspersedsegments,SINEs)平均长度300bp，拷贝数可达10万左右长分散片段(longinterspersedsegments,LINEs)平均长度3500~5000bp，拷贝数达1万左右在人类基因组中约占12%中度重复序列大多数不编码蛋白质,与单拷贝基因间隔排列有些是编码蛋白质或RNA的结构基因（HLA、rRNA、tRNA、组蛋白、免疫球蛋白基因）可存在于结构基因之间、基因簇之中、内含子内部高度重复