高效液相色谱优秀 (3).pptVIP

化学键合相1.非极性键合相：表面基团为非极性烃基，如十八烷基、辛烷基等。C18最常见的非极性键合相R=-CH3-C4Hg-C8H17octyl-C18H37n-octyldecyl-ODS第30页，共60页，星期日，2025年，2月5日液相色谱流动相既可携带样品，也进行分配要求如下：（1）黏度小。（2）沸点低、固体残留物少（3）与检测器相适应（4）与色谱系统相适应（5）溶剂纯度第31页，共60页，星期日，2025年，2月5日固定相和流动相的选择根据样品的极性，对选择十分关键，一般官能团相对极性大致顺序为：CxHy醚酯酮醛亚胺氨醇水要获得较好的分离度，则要求仔细考察样品，流动相固定相的极性配合与平衡。但有关理论并不完善，大多数还是用实验方法获得。先选一种柱子试，反复之后，不行再换。第32页，共60页，星期日，2025年，2月5日3-6高效液相色谱仪液体输送系统、进样系统、分离系统、检测系统第33页，共60页，星期日，2025年，2月5日第34页，共60页，星期日，2025年，2月5日第35页，共60页，星期日，2025年，2月5日溶剂在放入贮液罐前必须经过0.45μm滤膜过滤，除去溶剂中的杂质。流动相在使用前必须脱气处理，除去其中溶解的气体。常用的脱气方法：吹氦脱气法、加热回流法、抽真空脱气法、超声脱气法液体输送系统储液瓶、高压泵、梯度洗脱装置第36页，共60页，星期日，2025年，2月5日梯度洗脱装置 通过两个输液泵流速的变化，改变流动相的洗脱能力，其作用与气相色谱的程序升温类似。CABABC第37页，共60页，星期日，2025年，2月5日溶剂A溶剂B电磁阀A电磁阀B混合室泵溶剂A溶剂B高压泵A高压泵B混合室低压溶剂梯度方框图高压溶剂梯度方框图梯度洗脱流程第38页，共60页，星期日，2025年，2月5日进样系统六通进样阀结构示意图第39页，共60页，星期日，2025年，2月5日分离系统——色谱柱包括柱管与固定相两部分一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm凝胶色谱柱内径3～12mm微柱内径1-2mm，长1-5cm制备往内径较大，可达25mm以上第40页，共60页，星期日，2025年，2月5日检测系统通用型检测器：示差折光检测器、电导检测器、蒸发光散射检测器选择性检测器：紫外检测器、荧光检测器第41页，共60页，星期日，2025年，2月5日检测系统紫外检测器示差折光检测器荧光检测器电导检测器第42页，共60页，星期日，2025年，2月5日第1页，共60页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱与其他仪器相比特点：（1）高压（2）高速（3）高效（4）高灵敏度3-1高效液相色谱法概述第2页，共60页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法概述经典的液相色谱法与现代液相色谱法的比较1.流动相的输送形式不同。2.分析周期不同。3.柱效不同。液相色谱与气相色谱的比较相同点：液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。根据保留值定性、根据峰高或峰面积定量。第3页，共60页，星期日，2025年，2月5日不同点：（1）应用范围不同气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析。第4页，共60页，星期日，2025年，2月5日（2）液相色谱能完成难度较高的分离工作气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程。液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地大；液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。（3）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。第5页，共60页，星期日，2025年，2月5日3-2影响液相色谱柱的因素