禽病血液检测技术.pdf

《禽病防治技术》

血液中寄生虫检测技术

1目的

1.1使检测员熟悉并掌握动物血液中原虫进行检查（血液涂片检查法、

鲜血压滴检查法、虫体浓集法）。

2适用范围

2.1本实验适用于动物血液中原虫进行检测过程。

3试剂和仪器设备

3.1试剂和材料

注射器、载玻片、盖玻片、姬姆萨氏染液、瑞特氏染液、中性蒸

馏水或pH7.0缓冲液、3.8%的枸橼酸钠。

3.2仪器设备

显微镜、离心机。

4方法与步骤

4.1血液涂片检查法

翅静脉采血血制成涂片。

4.1.1姬姆萨氏染色法

4.1.1.1操作方法

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血片干燥后，滴数滴无水甲醇固定2min3min，然后滴加姬姆萨

~

氏染色液，染色30min60min，用缓冲液或中性蒸馏水冲洗，自然干

燥后镜检。

4.1.1.2染色液配制

取姬姆萨氏染色粉0.5g、中性甘油25mL、无水中性甲醇25mL。

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《禽病防治技术》

将染色粉置于研钵中先加少量甘油充分磨研，然后边加甘油边研磨，

直到甘油全部加完为止。将其倒入100mL的棕色瓶中，再用甲醇分几

次冲洗研钵，均倒入试剂瓶中。塞紧瓶塞后充分摇匀置于65℃温箱

~

中24h或室温下3天5天，期间不断摇动和过滤，滤液即为原液用时

~

将原液充分振荡后，用缓冲液或中性蒸馏水10倍20倍稀释。

4.1.2瑞特氏染色法

4.1.2.1操作方法

~

在血片上滴加瑞特氏染色液1滴2滴，染色1min后，加等量的

中性蒸馏水或pH7.0缓冲液与染液混合，5min后用中性蒸馏水或

pH7.0缓冲液冲洗，自然干燥后镜检。

4.1.2.2染色液配制

取瑞特氏染色粉0.3g、中性甘油3mL、无水甲醇(不含丙酮）97mL。

将染色粉与甘油一起在研钵中研磨，然后加入甲醇，充分搅拌，装入

~

色瓶内，塞紧瓶塞，经过2周3周，过滤后备用。该染色液放置时间

愈长效果愈好。

4.1.2.3缓冲液配制

第1液为磷酸氢二钠11.87g，加中性蒸馏水1000mL，第2液为

磷酸二氢钾9.077g，加中性蒸馏水1000mL。取第1液61.1mL与第2

液38.9mL混合，即成pH7.0缓冲液。

4.2鲜血压滴检查法

在载玻片上滴加一滴生理盐水，滴上一滴被检血液，充分混合，

加盖玻片、静置片刻后镜检。先用低倍镜暗视野检查，发现有可疑运

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《禽病防治技术》

动虫体时，再换高倍镜检查。适用于伊氏锥虫的检查。

4.3虫体浓集法

适用范围适用于伊氏锥虫病和梨形虫病的检查。

4.3.1原理

其原理是锥虫或寄生有梨形虫的红细胞较正常红细胞的比重小，

所以在第1次沉淀时，正常红细胞下降，而锥虫或寄生有梨形虫的红

细胞尚悬浮在血浆中；第2次离心沉淀时，则将其浓集于管底。

4.3.2操作方法

翅静脉采血，按4:1的比例与3.8%的枸橼酸钠充分混合。取此

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抗凝血6mL7mL，以500r/min离心沉淀5min，使其中大部分红细胞

沉降；然后将含有少量红细胞、白细胞和虫体的上层血浆移入另一支

离心管中，补加生理盐水，以2500r/min离心沉淀10min。取沉淀物

制成抹片，用姬姆萨氏或瑞特氏染色法染色镜检。

5结果分析与判断

禽血液中原虫常见的是住白细胞虫。在显微镜下观察到成熟的配

子体即可确诊，配子体主要有2种：

5.1沙氏住白细胞