建兰中茉莉酸与茉莉酸甲酯合成相关酶基因的克隆、表达特性及功能解析.docxVIP

建兰中茉莉酸与茉莉酸甲酯合成相关酶基因的克隆、表达特性及功能解析

一、引言

1.1研究背景

建兰（Cymbidiumensifolium），作为兰科兰属地生植物，在观赏及香料提取领域都占据着重要地位。其株丛蓬勃，叶态多姿，叶片终年碧绿，花形多样，色彩丰富，且花具浓郁香气，是观赏价值较高的盆栽花卉，适宜在客厅、会议室、宾馆或庭园摆放，深受人们喜爱。在香料提取方面，建兰独特的香气成分使其具备开发为天然香料的潜力，具有一定的经济价值。

茉莉酸（jasmonicacid，JA）和茉莉酸甲酯（methyljasmonate，MeJA）是广泛存在于植物中的一类重要的内源激素。在植物生长发育进程中，茉莉酸和茉莉酸甲酯发挥着关键作用。它们参与调控植物的种子萌发、根系生长、叶片衰老、开花、果实成熟等多个过程。研究表明，外源施加茉莉酸甲酯能够影响植物的开花时间和花器官的发育，在拟南芥中，茉莉酸甲酯处理可导致开花时间提前。在植物应对生物和非生物胁迫时，茉莉酸和茉莉酸甲酯作为重要的信号分子，能够诱导植物产生一系列防御反应，增强植物的抗逆性。当植物遭受昆虫侵害时，体内茉莉酸含量迅速上升，激活防御基因的表达，合成蛋白酶抑制剂等防御物质，从而抵御昆虫的进一步侵害；在干旱、盐胁迫等非生物胁迫下，茉莉酸和茉莉酸甲酯可调节植物体内的渗透调节物质含量和抗氧化酶活性，维持细胞的渗透压和膜稳定性，提高植物的抗逆能力。茉莉酸和茉莉酸甲酯在植物次生代谢产物合成中也起着重要的调控作用，许多研究发现，它们能够诱导植物合成生物碱、萜类、黄酮类等次生代谢产物。

鉴于茉莉酸和茉莉酸甲酯在植物生命活动中的重要作用，研究建兰中茉莉酸和茉莉酸甲酯合成相关酶基因具有重要意义。这有助于深入揭示建兰花香形成的分子机制，因为花香成分的合成与茉莉酸信号通路密切相关。通过对相关酶基因的研究，能够了解茉莉酸和茉莉酸甲酯在调控建兰花香物质合成过程中的作用，为解析建兰花香的形成机制提供理论依据。研究建兰中茉莉酸和茉莉酸甲酯合成相关酶基因对于指导建兰的遗传改良和品种选育具有重要价值。通过基因工程技术对这些关键酶基因进行调控，有望培育出具有更浓郁花香、更强抗逆性的建兰新品种，满足市场对高品质建兰的需求，推动建兰产业的发展。

1.2国内外研究现状

在模式植物中，茉莉酸和茉莉酸甲酯的合成途径及相关酶基因已得到较为深入的研究。茉莉酸的生物合成主要通过十八烷途径，该途径从亚麻酸开始，在脂氧合酶（LOX）、丙二烯氧化物合酶（AOS）、丙二烯氧化物环化酶（AOC）、12-氧-植物二烯酸还原酶（OPR）等多种酶的作用下，逐步合成茉莉酸。在拟南芥中，已鉴定出多个参与茉莉酸合成的基因，如LOX2、AOS1、AOC3、OPR3等，这些基因的突变体表现出茉莉酸合成受阻以及相关生理功能的改变。茉莉酸甲酯则是由茉莉酸在茉莉酸羧基甲基转移酶（JMT）的催化下形成，拟南芥中的JMT基因在茉莉酸甲酯的合成中起着关键作用。

关于建兰的研究，目前主要集中在花香成分分析及部分花器官发育基因的研究。采用固相微萃取和GC/MS技术对建兰花部的挥发性香气成分进行分析，发现建兰花部主要挥发性香气成分包括倍半萜类、酯类、酮酚类、烃类等，其中茉莉酸甲酯是主要成分之一。在花器官发育基因研究方面，对建兰若干花器官发育基因如AGL6、AMT1、AP3、SEP4、PI和AG等进行了表达分析和功能研究，发现这些基因在花蕾、开放前、开放时和开放后不同时间点的不同花器官中表达存在差异。然而，建兰中茉莉酸和茉莉酸甲酯合成相关酶基因的研究还相对匮乏。虽然已知茉莉酸和茉莉酸甲酯在植物生长发育和抗逆等方面具有重要作用，但对于建兰中这些相关酶基因的具体序列、结构、表达模式以及它们如何调控茉莉酸和茉莉酸甲酯的合成，进而影响建兰的花香形成、生长发育和抗逆性等方面，仍缺乏深入的了解和研究。

1.3研究目的与意义

本研究旨在克隆建兰茉莉酸和茉莉酸甲酯合成相关酶基因，并对其表达模式进行分析。通过基因克隆技术，获取建兰中参与茉莉酸和茉莉酸甲酯合成的关键酶基因的序列，为后续研究提供基础。利用实时荧光定量PCR等技术，研究这些酶基因在建兰不同组织、不同发育时期以及在生物和非生物胁迫条件下的表达变化规律。

深入研究建兰茉莉酸和茉莉酸甲酯合成相关酶基因，对于揭示建兰花香形成的分子机制具有重要意义。花香是建兰重要的观赏性状之一，茉莉酸和茉莉酸甲酯在植物次生代谢产物合成中起着关键的调控作用，通过研究相关酶基因，能够明确茉莉酸和茉莉酸甲酯信号通路在建兰花香物质合成中的调控机制，从而从分子层面解析建兰花香的形成过程。这不仅有助于丰富对植物花香形成机制的理论认识，也为其他花卉植物花香研究提供借鉴。研究建兰茉莉酸和茉莉酸甲酯合成相关酶基因，能够为建兰的遗传改