PDA培养基制备技术规范.docxVIP

PDA培养基制备技术规范

一、引言

PDA培养基，即马铃薯葡萄糖琼脂培养基，是微生物学实验室中一种常用的基础培养基，尤其适用于真菌的分离、培养与鉴定。其主要成分为马铃薯浸出液、葡萄糖和琼脂。马铃薯浸出液能提供微生物生长所需的多种维生素、矿物质及氨基酸等天然营养物质；葡萄糖作为碳源，为微生物代谢提供能量；琼脂则作为凝固剂，使培养基在常温下形成固体状态，便于微生物的菌落观察和纯化。本规范旨在提供一套标准化、可操作的PDA培养基制备流程，以确保培养基质量的稳定性与可靠性，从而保障后续微生物学实验结果的准确性。

二、培养基配方与成分

（一）标准配方（可根据实际需求调整）

通常情况下，每升PDA培养基的组成如下：

*马铃薯（去皮）：200克

*葡萄糖：20克

*琼脂：15-20克

*蒸馏水：1000毫升

（二）成分说明

1.马铃薯：应选择新鲜、无发芽、无霉变的马铃薯。发芽马铃薯可能含有龙葵素，对某些微生物有抑制作用，应避免使用。

2.葡萄糖：分析纯或生化试剂级葡萄糖。作为主要碳源，其含量直接影响微生物的生长速度和菌落形态。

3.琼脂：优质琼脂粉或琼脂条，凝固力强，杂质少。琼脂的用量可根据所需培养基的硬度进行微调，夏季可适当增加，冬季可适当减少。

4.蒸馏水：应使用纯化水或蒸馏水，避免自来水中可能含有的氯、重金属离子等对微生物生长产生不良影响。

三、制备步骤

（一）溶液制备

1.马铃薯浸出液制备：

a.将马铃薯洗净、去皮，切成约1厘米见方的小块，称取规定量。

b.将马铃薯块置于烧杯中，加入适量蒸馏水（略多于最终定容体积，一般为____毫升）。

c.加热煮沸，保持微沸状态约20-30分钟，直至马铃薯块酥软但未烂成泥状为宜。此间注意搅拌，防止糊底。

d.停止加热，待稍冷却后，用洁净的纱布或脱脂棉趁热过滤，收集滤液于另一烧杯中。用少量热蒸馏水冲洗残渣2-3次，将冲洗液并入滤液，以确保有效成分充分转移。

2.溶解与定容：

a.将上述马铃薯浸出液趁热（或加热至约50-60℃）加入称取好的葡萄糖，搅拌至完全溶解。

b.加入称取好的琼脂，继续加热并不断搅拌，直至琼脂完全融化。此过程需注意控制火候，避免剧烈沸腾导致水分过度蒸发或培养基糊底焦化。若在加热过程中水分蒸发过多，可适当补充蒸馏水至接近1000毫升。

c.将融化好的培养基用热蒸馏水定容至1000毫升，搅拌均匀。

（二）pH值调整（通常情况下PDA培养基无需严格调整pH，因其成分本身pH在5.0-6.0之间，适合真菌生长。若有特殊要求）

a.取少量培养基冷却至约50℃，用精密pH试纸或pH计测定其pH值。

b.如需调整，用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液缓慢滴加，边加边搅拌，直至达到所需pH值（通常为自然pH，或根据特定菌种要求调整）。

（三）分装

a.将定容并调整好pH（若必要）的培养基趁热分装于适当的容器中，如试管、锥形瓶等。

b.分装时注意避免培养基沾污容器口和外壁。分装量根据实际需要确定，如试管一般分装至试管长度的1/5至1/4，锥形瓶则不宜超过其容积的2/3，以利于灭菌和后续操作。

c.分装后，试管应及时塞上棉塞或硅胶塞，锥形瓶用棉塞或透气的封口膜封盖，并进行适当标记（如培养基名称、制备日期、制备人等）。

（四）灭菌

a.将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。

b.灭菌条件通常为121℃，维持15-20分钟。具体灭菌时间需根据灭菌锅内物品数量及容器大小适当调整，以确保灭菌彻底。

c.灭菌过程中，应注意排放灭菌锅内冷空气，以保证灭菌效果。

（五）灭菌后处理

a.灭菌结束后，待灭菌锅内压力自然降至常压，温度下降后，方可打开锅盖取出培养基。

b.如需制备斜面培养基，应在培养基凝固前，将试管倾斜至适当角度，待其自然冷却凝固。斜面长度一般为试管长度的1/2左右。

c.制备好的平板或斜面应倒置存放于清洁、干燥、避光的环境中，待完全凝固后，经无菌检查合格后方可使用。

四、质量控制与检查

（一）无菌性检查

a.每批次制备的培养基，应抽取适量样品（如1-2支试管或1-2个平板），置于36±1℃培养箱中培养48-72小时。

b.若培养基表面及内部均无任何微生物生长，则判定无菌性合格；若出现菌落，则该批次培养基灭菌不合格，不得使用。

（二）pH值检查

a.可在灭菌前或灭菌后（冷却至50℃左右）取样测定pH值。灭菌后pH值通常会略有下降。

b.若对pH值有严格要求，应确保其在规定范围内。

（三）外观检查

a.合格的PDA培养基应为淡黄色、透明或半透明的固体，质地均匀，无明显沉淀、浑浊或颜色异常。

b.琼脂凝固应良好，无裂纹、气泡（少量小气泡可接受）。

c.容器清洁，无破损，封口严密。

（四）