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副猪嗜血杆菌nanH和lsgB基因缺失株的特性解析：免疫保护力与毒力研究

一、引言

1.1研究背景与意义

副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis，HPS），作为巴斯德菌科嗜血杆菌属的一员，是一种严重危害养猪业的病原菌。自1910年德国学者Glasser首次发现其与猪的纤维素浆膜炎和多发性关节炎有关以来，副猪嗜血杆菌病（又称革拉瑟氏病）逐渐受到广泛关注。该菌主要感染2周龄至4月龄的猪只，尤其是断奶前后和保育期的仔猪，这一阶段的猪只免疫系统尚未完全发育成熟，抵抗力较弱，更易受到感染。

副猪嗜血杆菌病在全球范围内广泛传播，给养猪业带来了沉重的经济负担。其主要临床症状包括发热、咳嗽、呼吸困难、关节肿胀、跛行等，严重时可导致猪只因呼吸衰竭或败血症而死亡。除了直接造成猪只的死亡损失外，患病猪只还会出现生长速度减缓、饲料转化率降低的情况。养殖户需要投入更多的饲料和时间来达到预期的出栏体重，极大地增加了养殖成本，降低了养殖的经济效益。同时，治疗疾病所需的药物费用、兽医服务费用以及因疫情防控而增加的消毒、隔离等措施的成本也不容小觑。疫情的发生还可能导致养殖场的声誉受损，影响猪肉产品的销售，进一步加剧经济损失。

目前，对于副猪嗜血杆菌病的防控主要依赖疫苗接种和抗生素治疗。然而，由于副猪嗜血杆菌具有多种血清型，且不同血清型之间的交叉保护力较弱，使得疫苗的防控效果受到限制。并且，随着抗生素的广泛使用，副猪嗜血杆菌的耐药性问题日益严重，给临床治疗带来了巨大挑战。因此，开发新型的防控策略迫在眉睫。

基因缺失株作为一种潜在的疫苗候选株，具有独特的优势。通过基因缺失技术，可以去除细菌中的毒力因子或关键致病基因，从而降低其致病性，同时保留其免疫原性，能够诱导机体产生针对野毒株的免疫反应。nanH和lsgB基因在副猪嗜血杆菌的致病过程中可能发挥着重要作用，研究这两个基因缺失株的免疫保护力和毒力，对于深入了解副猪嗜血杆菌的致病机制，开发高效的疫苗和防控策略具有重要意义。一方面，通过研究基因缺失株的免疫保护力，可以评估其作为疫苗候选株的潜力，为新型疫苗的研发提供理论依据和实验基础；另一方面，研究基因缺失株的毒力变化，有助于揭示基因的功能和致病机制，为寻找新的药物靶点和防控措施提供线索。

1.2国内外研究现状

国外对副猪嗜血杆菌的研究起步较早，在多个方面取得了显著进展。在病原学方面，明确了其隶属于巴斯德菌科、嗜血杆菌属，是一种非溶血性的革兰氏阴性小杆菌，无鞭毛，缺乏运动性，可形成荚膜和菌毛，具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）依赖性，目前已暂时分为15个血清型，还有一些菌株尚未确定血清型。在流行病学研究中，发现猪是副猪嗜血杆菌的唯一宿主，带菌猪和病猪是主要传染源，主要通过空气、猪只接触以及污染排泄物传播，1-2月龄的断奶仔猪或保育阶段的猪更易发病。在致病机制研究上，揭示了该菌可通过多种毒力因子，如荚膜多糖、外膜蛋白、脂多糖等，逃避宿主免疫防御，引发机体的炎症反应，导致多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等病变。在诊断方法上，除了传统的细菌分离培养、生化鉴定外，还发展了多种血清学检测方法和分子生物学检测技术，如间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应（PCR）等，提高了诊断的准确性和时效性。在防治措施方面，研发了多种疫苗，包括灭活疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗等，并通过加强饲养管理、优化免疫程序、合理使用抗生素等综合措施来防控该病。

国内对副猪嗜血杆菌病的研究虽相对较晚，但近年来随着该病在国内的广泛流行，相关研究也取得了显著成果。在病原学研究中，确定了国内主要流行的血清型为4、5、12、13型和15型。在流行病学调查方面，通过对不同地区猪群的抗体检测和病原分离，发现国内猪群中副猪嗜血杆菌的感染较为普遍，抗体阳性率在9%-60%之间不等，且发病率呈上升趋势，断奶前后及保育猪的发病率相对较高。在致病机制研究上，国内学者也进行了大量探索，为深入了解该病的发病过程提供了理论依据。在诊断技术方面，不仅引进和应用了国外的先进检测方法，还自主研发了一些具有特色的诊断技术，如多重PCR、环介导等温扩增技术（LAMP）等，提高了检测的灵敏度和特异性。在防治措施上，在借鉴国外经验的基础上，结合国内养猪业的实际情况，提出了一系列适合国内猪场的综合防治方案，包括加强生物安全措施、提高饲养管理水平、合理使用疫苗和抗生素等。

然而，关于副猪嗜血杆菌nanH和lsgB基因缺失株的研究仍相对较少。nanH基因编码唾液酸酶，该酶在细菌与宿主细胞的黏附、侵袭以及免疫逃逸等过程中可能发挥重要作用。已有研究表明，唾液酸酶能够降解宿主细胞表面的唾液酸残基，从而暴露隐藏的受体位点，促进细菌的黏附和入侵。在其他细菌中，唾液酸酶还与细菌的毒