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食品中阪崎肠杆菌酶联免疫检测方法的优化与应用研究

一、引言

1.1研究背景与意义

食品安全问题一直是全球关注的焦点，其中食源性致病菌对人类健康的威胁尤为严重。阪崎肠杆菌作为一种重要的食源性致病菌，主要存在于环境中，特别容易污染婴幼儿配方奶粉等食品。对于免疫力低下的婴幼儿，尤其是早产儿和新生儿，一旦摄入被阪崎肠杆菌污染的食品，可能引发严重的感染性疾病，如脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎等，这些疾病不仅会对婴幼儿的身体健康造成极大的损害，甚至可能导致死亡，死亡率高达20%-50%。据相关资料记载，自1958年以来，全球共报道了120起阪崎肠杆菌引起的感染事件，这充分说明了阪崎肠杆菌对婴幼儿健康的严重威胁。

目前，传统的检测方法存在检测周期长、操作复杂等问题，难以满足快速、准确检测阪崎肠杆菌的需求。随着生物技术的不断发展，酶联免疫检测方法因其具有快速、灵敏、特异等优点，逐渐成为食品中微生物检测的研究热点。因此，开展食品中阪崎肠杆菌酶联免疫检测方法的研究具有重要的现实意义。一方面，该研究有助于提高食品中阪崎肠杆菌的检测效率和准确性，为食品安全监管提供有力的技术支持，及时发现和控制受污染的食品，保障消费者的健康；另一方面，该方法的建立也有助于推动食品检测技术的发展，为其他食源性致病菌的检测提供新思路和方法。

1.2阪崎肠杆菌概述

阪崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）属于肠杆菌科肠杆菌属，是一种革兰氏阴性杆菌，细胞大小为0.6-1.1μm×1.2-3.0μm，无芽孢，兼性厌氧，通过周生鞭毛运动。其生长温度范围较广，在6-45℃均可生长，最适生长温度为37-43℃，对营养要求不高，在普通培养基上即可生长良好。

阪崎肠杆菌分布广泛，在自然环境和厂房环境中均有存在，如土壤、水、蔬菜、水果、肉制品、谷物制品等，也常见于生产婴儿配方奶粉的设施和家居环境中。在食品加工过程中，尤其是奶粉生产的干燥和罐装环节，容易受到阪崎肠杆菌的污染。据相关研究表明，1988年Muytjens等对35个国家的140个食品抽查，发现有20例中存在阪崎肠杆菌，样品的阳性率为14.2%，含量一般在0.36-66/100g。

阪崎肠杆菌是一种条件致病菌，主要危害对象是免疫力低下的新生儿、早产儿、出生体重低下或免疫力低下的婴儿以及老人。其致病机制主要是通过黏附、侵袭宿主细胞，产生毒素等方式，破坏宿主的免疫系统和组织器官。当阪崎肠杆菌进入人体后，会黏附在肠道上皮细胞表面，然后侵入细胞内，在细胞内繁殖并释放毒素，导致肠道炎症、坏死等病变。同时，阪崎肠杆菌还可能通过血液循环进入其他器官，如脑膜、血液等，引起脑膜炎、败血症等严重疾病。这些疾病不仅会对患者的身体健康造成极大的损害，还可能导致神经系统后遗症，影响患者的生长发育和生活质量。

例如，2002-2003年美国某知名奶粉生产厂曾自发召回了含有阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉；2008年味全配方奶粉被检出含有致病菌阪崎肠杆菌。这些事件不仅对消费者的健康造成了威胁，也给相关企业带来了巨大的经济损失，引起了社会各界对阪崎肠杆菌的广泛关注。

1.3检测方法现状

目前，食品中阪崎肠杆菌的检测方法主要包括传统培养法、分子生物学法、免疫学方法等。

传统培养法是检测阪崎肠杆菌的经典方法，主要包括菌株分离培养、光学镜检检测、生化检测、鉴定等多个步骤。该方法对设备要求不高，检测费用较低，但检测周期长，一般需要3-5天，且操作复杂，容易受到杂菌干扰，灵敏度较低，难以满足快速检测的需求。

分子生物学法主要包括聚合酶链式反应（PCR）、荧光定量PCR等技术。这些方法具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，能够在短时间内检测到微量的阪崎肠杆菌。然而，分子生物学法也存在一些局限性，如需要昂贵的实验设备和专业的操作人员，对实验条件要求严格，容易出现假阳性和假阴性结果，且无法区分死菌和活菌，在基层食品检测工作中难以广泛应用。

免疫学方法主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫层析法等。其中，酶联免疫法是利用抗原与抗体的特异性结合原理，通过检测抗原-抗体复合物来确定样品中是否存在阪崎肠杆菌。该方法具有快速、灵敏、特异、操作简便、成本较低等优点，能够在2-4小时内完成检测，且可以进行批量检测。同时，酶联免疫法还可以检测食品中的微量阪崎肠杆菌，对早期检测和预防阪崎肠杆菌污染具有重要意义。此外，该方法对实验设备要求不高，易于在基层实验室推广应用。然而，酶联免疫法的稳定性和特异性依赖于抗体质量，抗体的选择和制备需要耗费一定的时间和精力，并且需要对抗体的存储等条件进行严格控制。

综上所述，不同的检测方法各有优缺点，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的检测方法